NY/T 4763-2025 桑叶中1-脱氧野尻霉素的测定 高效液相色谱串联质谱法

　　中华人民共和国农业行业标准

　　NY/T 4763—2025

　　桑叶中1-脱氧野尻霉素的测定高效液相色谱串联质谱法

　　Determination of 1-Deoxynojirimycin (DNJ) in mulberry leaf-High performance—Liquid chromatography tendem mass spectometry

　　2025-12-09 发布

　　2026-05-01 实施

　　中华人民共和国农业农村部 发 布

　　前 言

　　本文件按照 GB/T 1 .1—2020« 标准化工作导则 第 1 部分 : 标准化文件的结构和起草规则»的规定起草。

　　请注意本文件的某些内容可能涉及专利。 本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

　　本文件主要起草人 :张东阳 、陈涛 、姚晓慧 、刘利 、赵卫国 、杨佳昕 、佟万红 、于翠 、黄盖群 、罗国庆 、林强 、赵爱春。

　　桑叶中 1一脱氧野尻霉素的测定 高效液相色谱串联质谱法

　　1 范围

　　本文件规定了桑叶及以桑叶为原料的加工产品中 1 G脱氧野尻霉素含量测定的高效液相色谱串联质

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 . 其中 ,注日期的引用文件 ,仅该日期对应的版 本 适 用 于 本 文 件 ; 不 注 日 期 的 引 用 文 件 , 其 最 新 版 本(包 括 所 有 的 修 改 单)适 用 于 本文件 .

　　GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

　　3 术语和定义

　　本文件没有需要界定的术语和定义 .

　　4 原理

　　桑叶及以桑叶为原料的加工产品中的 1 G脱氧野尻霉素经乙醇 水溶液超声提取后 , 用微孔过滤膜过

　　5 试剂和材料

　　除非另有说明 ,在分析中仅使用分析纯试剂 ,水为 GB/T 6682 规定的一级水 .

　　5 .1 试剂

　　5 .1 .1 乙腈(C2 H3 N ,CAS:75G05G2) :色谱纯 .

　　5 .1 .2 甲酸(CH2 O2 ,CAS:64G 18G 6) :色谱纯 .

　　5 .1 .3 甲醇(CH4 O,CAS:67G 56G 1) :色谱纯 .

　　5 .1 .4 乙醇(C2 H6 O,CAS:64G 17G 5) .

　　5 .1 .5 提取剂 : 乙醇+水= 70+30(V+V) ,取 700 mL乙醇(5 .1 .4)和 300 mL水 ,混匀 .

　　5 .1 .6 流动相 A: 乙腈+甲酸= 999+1 (V+V) ,取 999 mL乙腈(5 .1 .1)和 1 mL 甲酸(5 .1 .2) ,混匀 .

　　5 .1 .7 流动相 B:水+甲酸= 999+1 (V+V) ,取 999 mL水和 1 mL 甲酸(5 .1 .2) ,混匀 .

　　5 .2 标准品

　　HPL尻 GGj的irii,6录134 ,CAS: 19130G 96G2)相对分子质量为 163 .17 ,

　　5 .3 标准溶液配制

　　5 .3 .1 1 G脱氧野尻霉素标准储备液 :准确称取 1 G脱氧野尻霉素标准品(5 .2)1 mg(精确至 0 .01 mg) ,用甲

　　5 .3 .2 1 G脱氧野尻霉素标准工作溶液 :取 1 G脱氧野尻霉素标准储备液(5 .3 .1)用甲醇(5 .1 .3)溶液稀释 ,

　　并配制成质量浓度为 0 .2 mg/L、1 .0 mg/L、5 .0 mg/L、10 .0 mg/L、20 .0 mg/L、30 .0 mg/L、40 .0 mg/L、 50 .0 mg/L的标准工作溶液 ,现用现配。

　　6 仪器和设备

　　6 .1 高效液相色谱串联质谱仪 :配备电喷雾离子源(ESI) 。

　　6 .2 超声波提取器。

　　6 .3 分析天平 :感量 0 .01 g 和 0 .000 01 g。

　　6 .4 粉碎机。

　　6 .5 组织捣碎机。

　　6 .6 旋转蒸发仪。

　　6 .7 有机相微孔滤膜 :0 .22 μm。

　　7 试验方法

　　7 .1 试样制备

　　7 .1 .1 干桑叶 :放入粉碎机中粉碎 ,采用四分法分取样品 ,样品全部过 60 目的标准网筛。

　　7 .1 .2 鲜桑叶 :采用四分法分取样品 ,放入组织捣碎机中匀浆。

　　7 .1 .3 以桑叶为原料的加工产品 : 固体样品放入粉碎机中粉碎 ,采用四分法分取样品 ,样品全部过 60 目的标准网筛 ;液体样品充分混匀后直接取样。

　　7 .2 提取

　　7 .2 .1 干桑叶

　　称取试样 2 g(精确至 0 .01 g)于 50 mL锥形瓶中 ,加入 20 mL提取剂(5 .1 .5) ,30 ℃ 条件下超声提

　　取 20 min。将试样及提取液转移至抽滤漏斗上 ,减压抽滤 , 收集滤液 ,残渣再以 20 mL提取剂(5 .1 .5)重

　　7 .2 .2 鲜桑叶

　　称取试样 10 g(精确至 0 .01 g)于 500 mL锥形瓶中 ,加入 200 mL提取剂(5 .1 .5) ,30 ℃ 条件下超声提取 20 min。将试样及提取液转移至抽滤漏斗上 ,减压抽滤 ,收集滤液 ,残渣再以 200 mL提取剂(5 .1 .5)重复提取 1 次 ,合并两次滤液 ,并用提取剂(5 .1 .5)定容至 500 mL(V) ,超声波处理 2 min,充分混合均匀 , 0 .22 μm 有机相微孔滤膜过滤 ,待测。

　　7 .2 .3 以桑叶为原料的加工产品

　　固体样品 :称取试样 2 g(精确至 0 .01 g)于 50 mL锥形瓶中 ,加入 20 mL提取剂(5 .1 .5) ,在匀浆机

　　中匀浆 2 min,30 ℃ 条件下超声提取 20 min。将试样及提取液转移至抽滤漏斗上 ,减压抽滤 , 收集滤液 ,

　　残渣再以 20 mL提取剂(5 .1 .5)重复提取 1 次 ,合并两次滤液 ,并用提取剂(5 .1 .5)定容至 50 mL(V) ,超

　　声波处理 2 min,充分混合均匀。 取样品提取液 10 .00 mL(V1) , 在 50 ℃ 下减压浓缩至近干 , 用提取剂

　　(5 .1 .5)定容至 1 mL(V0) ,0 .22 μm 有机相微孔滤膜过滤 ,待测。

　　液体样品 :称取试样 10 g(精确至 0 .01 g) ,加水定容至 10 mL(V) ,摇匀 ,静置 ,取上清液经 0 .22 μm有机相微孔滤膜过滤 ,待测。

　　7 .3 测定

　　7 .3 .1 高效液相色谱串联质谱仪参考条件

　　7 .3 .1 .1 高效液相色谱参考条件

　　a) 色谱柱 :TSKgelAmide_80 column,2 .0 mm×150 mm ,5 μm ,或相当者 ;

　　b) 柱温 :40 ℃ ;

　　c) 流动相 :流动相 A 为甲酸 乙腈溶液(5 .1 .6) ,流动相 B 为甲酸水溶液(5 .1 .7) ,高效液相色谱梯

　　度洗脱条件见表 1 ;

　　d) 流速 :0 .2 mL/min;

　　e) 进样量 :2 μL。

　　表 1 高效液相色谱梯度洗脱条件

　　7 .3 .1 .2 串联质谱参考条件

　　a) 电离方式 : 电喷雾离子源(ESI) ,正离子模式 ;

　　b) 喷雾电压 :4 000 V;

　　c) 气化室温度 :300 ℃ ;

　　d) 鞘气压力 :25 psi;

　　e) 辅助气体流速 :2 L/min;

　　f) 毛细管温度 :270 ℃ ;

　　g) 扫描模式 :多反应监测模式(MRM) ,监测离子对 、碰撞气能量和套管透镜电压见表 2 。

　　表 2 1 一脱氧野尻霉素质谱参数

　　7 .3 .2 定性测定

　　按照 7 .3 .1 的仪器条件对标准工作溶液和样品提取液进行分析 ,将样品色谱峰的保留时间与标准品

　　的保留时间进行对照 ,样品与标准品保留时间的相对偏差不大于 5% ;样品特征离子与标准品各特征离子

　　相对照 ,样品特征离子的相对丰度与标准品的相对丰度偏差不超过表 3 的规定 ,则可判定样品中含有 1 一脱氧野尻霉素。

　　表 3 定性测定时相对离子丰度最大允许偏差

　　单位为百分号

　　7 .3 .3 定量测定

　　采用外标法定量测定。 测定标准工作溶液 , 以峰面积为纵坐标 ,对应的标准工作溶液浓度为横坐标 ,

　　绘制标准工作曲线。

　　取样品待测液 ,按照 7 .3 .1 仪器条件进行测定 ,记录色谱峰的保留时间和峰面积 ,用标准工作曲线对样品进行定量 ,样品溶液中待测物响应值均应在仪器测定的线性范围之内。

　　7 .4 空白试验

　　除不加试样外 ,其他步骤均按上述步骤进行。

　　8 结果计算

　　试样中 1一脱氧野尻霉素的含量以质量分数 ⑴ 表示 ,单位为毫克每千克(mg/kg) ,按公式(1)计算。

　　ω×n … … … … … … … … … … … … … … … … … (1)

　　式中 :

　　ρ— 由标准曲线计算出样品溶液中 1一脱氧野尻霉素质量浓度的数值 ,单位为毫克每升(mg/L) ;

　　V— 提取液定容体积的数值 ,单位为毫升(mL) ;

　　m— 样品质量的数值 ,单位为克(g) ;

　　n— 稀释倍数(稀释倍数为样品提取液稀释后体积 V0 与稀释前体积 V1 之比。 干桑叶提取液稀释后体积 V0 = 100 mL,稀释前体积 V1 = 5 mL,稀释倍数 n= 20;鲜桑叶及以桑叶为原料的液体

　　9 色谱图

　　1一脱氧野尻霉素多反应监测(MRM)色谱图见附录 B。

　　10 精密度

　　10 .1 重复性

　　在重复性条件下 ,获得的 2 次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的 10% 。

　　10 .2 再现性

　　在再现性条件下 ,获得的 2 次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的 15% 。

　　附 录 A

　　(资料性)

　　1一脱氧野尻霉素标准品的结构式

　　1一脱氧野尻霉素标准品的结构式见图 A.1

　　HO

　　NH

　　OH HO

　　H

　　图 A.1 1 一脱氧野尻霉素标准品的结构式

　　附 录 A

　　(资料性)

　　1一脱氧野尻霉素多反应监测(MRM)色谱图

　　1一脱氧野尻霉素多反应监测(MRM)色谱图见图 B.1

　　图 B.1 1 一脱氧野尻霉素多反应监测(MRM)色谱图