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CSF
团 体 标 准
T/CSF 0135—2025
落叶松抗旱性早期鉴定技术规程
Technical specification of practice for identification and evaluation of
drought resistance in young Larix spp.
2025-12-16 发布 2025-12-16 实施
中国林学会 发 布
前 言
本文件按照 GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由中国林学会提出并归口。
本文件起草单位：中国林业科学研究院林业研究所、东北林业大学、黑龙江省林业科学研究所。本文件主要起草人：罗志斌、李成浩、王福德、张立峰、邓澍荣、刘俊祥、马文旭、郭琪。
落叶松抗旱性早期鉴定技术规程
1 范围
本文件规定了落叶松细胞系、种子萌发期、苗期及幼树抗旱性鉴定方法和判定规则。
本文件适用于落叶松抗旱性的早期鉴定。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB 2772 林木种子检验规程
GB/T 27425 科研实验室良好规范
LY/T 2291 落叶松温室容器育苗技术规程
LY/T 2908 主要树种龄级与龄组划分
NY/T 3851 谷子抗旱性鉴定技术规程
NY/T 4473 玉米抗旱性鉴定评价技术规程
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
抗旱性 drought resistance
在干旱胁迫下，细胞或植株维持生存、生长或恢复的能力。
3.2
胚性细胞系 embryogenic cell lines
未成熟胚诱导的原胚组织，由胚性细胞和胚柄细胞组成，特定条件下可通过增殖分裂继代培养，具有发育成体细胞胚并形成完整植株的能力，下文简称细胞系。
3.3
苗期 seedlings
种子发芽出土后，在良好土壤及适宜水分、温度和光照条件下，生长 0~2 年的一个时期。
3.4
幼树 juvenile trees
人工落叶松林中树龄≤20 年的落叶松。
3.5
抗旱材料 drought-resistance materials
在干旱胁迫条件下，达到中抗及以上的细胞系、种子、苗木及幼树等材料。
3.6
细胞系相对生长率 relative growth rate of cell lines
在一定培养期内，干旱条件下细胞系与对照生物量相对增长量的百分比。
3.7
种子相对发芽率 relative seed germination rate
在规定时间内，干旱条件下种子发芽率与对照条件下种子发芽率的百分比。
3.9
幼苗干旱存活率 seedling drought survival rate
干旱―复水后存活的幼苗数占干旱处理前总幼苗数的百分率。
3.10
水分饱和亏 water saturation deficit
针叶样品中饱和含水量与实际含水量差值占其最大可持水量的百分率。
4 抗旱性鉴定方法
4.1 细胞系抗旱性测定
4.1.1 培养基配制
以 BM 培养基为基础，添加 450 mg/L 谷氨酰胺、500 mg/L 酪蛋白水解物、1 000 mg/L 肌醇、0.1 mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸、0.05 mg/L 6-苄氨基腺嘌呤和 0.05 mg/L 6-糠基氨基嘌呤、30 g/L 蔗糖和 3 g/L 结冷胶，
细胞系抗旱性测定时，额外添加 7% 聚乙二醇-6 000(PEG-6 000)。培养基 pH 调至 5.8，经 121 ℃高温高压灭菌 15 min 后，分装至培养皿中，在无菌条件下冷却至常温备用。
4.1.2 细胞系培养与测定
取长势良好且状态一致的细胞系各 1.5 g，分别放入干旱和对照培养基中，在 25 ± 2 ℃的黑暗条件下培养 14 d 后，用天平分别称量其生物量。进行 3 次独立试验。细胞系相对生长率按公式(1)计算。
计算公式：
BGR … … … … … … … … … … (1)
式中：
BGR——细胞系相对生长率;
BT1——待干旱处理细胞系的初始质量，单位为克(g);
BT2——干旱处理 14 d 后的细胞系质量，单位为克(g);
Bw1——对照细胞系的初始质量，单位为克(g);
Bw2——培养 14 d 后的对照细胞系质量，单位为克(g)。
4.2 种子萌发期抗旱性鉴定
4.2.1 样品准备
将正常萌发率不低于 10 %的待测种子置于-20 ℃黑暗环境下 10 d，打破休眠后，使用 2 %的 NaClO溶液浸泡消毒 8 min，用蒸馏水冲洗干净，随机取 600 粒进行萌发测定，具体参照 GB 2772 的规定执行。
4.2.2 培养基质配制
经灭菌后的沙:草炭土:蛭石=1:1:1(V:V:V)配成基质。
4.2.3 干旱处理
4.2.3.1 胁迫溶液配制 将 192g 聚乙二醇-6000(PEG-6 000)溶解定容至 1 000 mL 去离子水中，即得到-0.5 MPa PEG-6 000 高渗溶液，用于落叶松抗旱性鉴定。
4.2.3.2 干旱处理试验 在装有基质的多孔育苗盘(每孔长宽高为 5 cm×5 cm×5 cm)中，每孔放入 4粒种子，干旱处理每孔加入 12 mL -0.5 MPa PEG-6 000 溶液，对照处理每孔加入 12 mL 去离子水，加盖育苗盘盖。进行 3 次独立试验，每次不少于 100 粒种子。
4.2.4 培养条件及种子相对发芽率计算
将上述育苗盘放置在25 ℃、500 μmol/m2/s 光照培养箱中培养(光照 16 h，黑暗 8 h)16 d，统计种
子发芽情况。种子相对发芽率计算方法参照 NY/T 4473 执行，具体按公式(2)计算。
计算公式：
DG … … … … … … … … … … (2)
式中：
DG——相对发芽率，单位为百分号(%);
X ——干旱处理 16 d 后的种子发芽率，单位为百分号(%);
ck——对照处理 16 d 后的种子发芽率，单位为百分号(%)。
4.3 苗期抗旱性鉴定
4.3.1 苗木准备
苗木准备工作参照LY/T 2291 的规定执行。
选择长势一致、苗高为 5 cm 的幼苗 30 株，移栽至相对含水量为(80±5)%的灭菌土壤中，缓苗14 d 至正常生长时进行干旱处理。进行 3 次独立试验。
4.3.2 干旱—复水处理及幼苗干旱存活率计算
在土壤饱和持水量时停止浇水，待土壤相对含水量降至(30 ± 5)%时进行复水，使土壤达到饱和持水量，复水 7 d 后调查存活幼苗数。3 次重复。幼苗干旱存活率计算方法参照 NY/T 3851 的规定执行，具体按公式(3)计算。
计算公式：
DS … … … … … … … … … … (3)
式中：
DS ——干旱存活率;
XDS ——干旱―复水后存活幼苗数;
XT ——干旱处理前的总幼苗数。
4.4 幼树抗旱性鉴定
4.4.1 样品获取
在 4 月~5 月份早春干旱时，采集落叶松样树中上部、南向健康的二年生枝上簇生针叶 5 g。落叶松幼树的选取参照 LY/T 2908 的规定执行。
4.4.2 样品处理及水分饱和亏的计算
采用称重法测量针叶样品的鲜重，将针叶样品分别用湿润滤纸夹住，在4 ℃的黑暗环境中储藏 12 h，取出后迅速用吸水纸吸去叶表面水分，立即称重。重复吸水和称重步骤，直到最后两次称重数值相同，即为叶饱和鲜重。然后将其放入信封内，75 ℃烘干48 h 以上至恒重，称量叶片干重。进行 3 次独立试验。水分饱和亏按公式(4)计算。
计算公式：
wSD … … … … … … … … … … (4)
式中：
wSD——样品水分自然饱和亏;
wf ——样品的自然鲜重，单位为克(g);
wd ——样品的干重，单位为克(g);
wt ——样品的饱和鲜重，单位为克(g)。
5 抗旱性判定规则
5.1 细胞系抗旱性判定
细胞系抗旱性判定见表 1。
表 1 细胞系抗旱性判定
5.2 种子萌发期抗旱性判定
种子萌发期抗旱性判定见表 2。
表 2 种子萌发期抗旱性判定
5.3 苗期抗旱性判定
苗期抗旱性判定见表 3。
表 3 苗期抗旱性判定
5.4 幼树抗旱性判定
幼树抗旱性判定见表4。
表 4 幼树抗旱性判定
6 记录与档案
将细胞系准备、种子准备、野外幼树取样地点、溶液配制、土壤准备、胁迫和对照处理、计算、评价等全过程进行详细记录，建立专用档案，按期归档。具体参照GB/T 27425 的规定执行。
参 考 文 献
[ 1] Li, X., Huang, F. & Gbur Jr., E. Effect of basal medium, growth regulators and Phytagel concentration on initiation of embryogenic cultures from immature zygotic embryos of loblolly pine (Pinus taeda L.). Plant Cell Reports 17, 298–301 (1998). https://doi.org/10.1007/s002990050396
