T/GXAS 1150-2025 人类辅助生殖技术实验室 体外受精-胚胎移植技术操作规程

　　GXAS

　　团 体 标 准

　　T/GXAS 1150—2025

　　人类辅助生殖技术实验室 体外受精-胚胎

　　移植技术操作规程

　　Technical code of pract ice in vitro fert i l izat ion and embryo transfer

　　in human ass isted reproduct ive technology laboratory

　　2025 - 11 - 28 发布 2025 - 12 - 04 实施

　　广西标准化协会 发 布

　　前 言

　　本文件参照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

　　请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

　　本文件由广西医学会提出、归口并宣贯。

　　本文件起草单位：南宁市第二人民医院、山东中医药大学附属医院、武汉大学人民医院、广东省第二人民医院、华中科技大学同济医学院附属协和医院、南昌大学第一附属医院、宜春市妇幼保健院、广西医科大学第一附属医院、广西壮族自治区生殖医院、贵港市人民医院、玉林市妇幼保健院、桂平市人民医院、右江民族医学院附属医院、柳州市妇幼保健院、桂林医科大学第一附属医院。

　　本文件主要起草人：许常龙、邓志华、牛向丽、江莉、李春苑、蒋满喜、段超群、胡林林、杨曾瑜、梁婷、张顺、刘冠良、欧湘红、翟丹梅、杨丹、覃爱平、李荣、王超、朱燕、刘倩、苑丽华、聂玲、曹现岭、王俊婷、马小星、罗丹、许定飞、陈自洪、杨华、邹彦、丘苗苗、曾建伟、韦永全、韦雅环、吴雨茵、韦秋敢、吴卓、谭庆英、张剑、邓李文、周玲、李宁、史秋雯、廖兰英、朱艺萍、朱俞欢、曾江辉、周元圆、宋景艳、相珊、于艺、郭子珍、牟珍妮、张良、谢青贞、邓星、季琳。

　　人类辅助生殖技术实验室 体外受精-胚胎移植技术操作规程

　　1 范围

　　本文件界定了人类辅助生殖技术实验室体外受精-胚胎移植技术操作相关的术语和定义及缩略语，确立了体外受精-胚胎移植操作的程序，规定了人员配备及场所准备、设备、试剂及耗材配备、IVF-ET的操作指示，描述了操作过程信息的追溯方法。

　　本文件适用于人类辅助生殖技术实验室体外受精-胚胎移植的操作。

　　2 规范性引用文件

　　本文件没有规范性引用文件。

　　3 术语和定义

　　下列术语和定义适用于本文件。

　　3.1

　　体外受精-胚胎移植 in vitro fertilization and embryo transfer

　　将患者夫妇的精子与卵子取出于体外，于培养皿内受精，并发育成胚胎后移植入患者宫腔内，让其种植，达到妊娠目的的一种技术，又称“试管婴儿 ”。

　　4 缩略语

　　下列缩略语适用于本文件。

　　IVF-ET：体外受精-胚胎移植(In Vitro Fertilization and Embryo Transfer)

　　OCCC：卵冠丘复合物(Oocyte Corona Cumulus Complex)

　　5 人员配备及场所准备

　　符合《人类辅助生殖技术规范》的规定。

　　6 设备、试剂及耗材配备

　　6.1 设备

　　6.1.1 常用设备包括：IVF 工作站、体式显微镜、倒置显微镜、培养箱、恒温设备(热板、恒温试管架、水浴锅)、液氮罐、移液枪、精液分析设备、离心机、液氮储存罐和运输罐、冰箱等。

　　6.1.2 特殊设备包括：气瓶、气体管道、不间断电源设备等。

　　6.2 试剂

　　包括缓冲培养液、受精培养液、卵裂培养液、囊胚培养液、移植培养液、胚胎玻璃化冷冻液等。

　　6.3 耗材

　　包括5mL、10mL圆底试管、各类辅助生殖技术专用培养皿、辅助生殖技术专用移液管、巴斯德吸管、移液管、140 μm、155 μm、220 μm剥卵针、胚胎冷冻专用载体等。

　　7 IVF-ET 操作

　　7.1 捡卵前准备

　　7.1.1 IVF-ET 培养液在取卵前 1d 进行，配制好后置于 37 ℃ 、6%CO2 培养箱内过夜平衡，所有培养皿

　　均标注患者夫妇双方信息和日期。

　　7.1.2 卵泡冲洗用缓冲培养液：取缓冲培养液放入 10mL 圆底试管中，紧盖后置于 37 ℃不通 CO2 气体的培养箱内过夜平衡。

　　7.1.3 捡卵皿的准备：取 1 mL 缓冲培养液加入中央单孔培养皿的中心孔，3 mL 缓冲培养液加入外围，盖矿物油 5 mL(中心孔 2 mL，外围 3 mL)，每个患者准备 1 个皿，置于 37 ℃不通 CO2 气体培养箱内过夜平衡。

　　7.1.4 洗卵皿的准备：取 1 mL 受精培养液放入中央单孔培养皿的中心孔，3 mL 缓冲培养液加入外围，盖矿物油 5 mL(中心孔 2 mL，外围 3 mL)，每个患者准备 1 个皿，置于 37 ℃ 、6%CO2 培养箱内平衡。

　　7.1.5 受精皿的准备：准备五孔板，预计患者卵泡数≤15 个准备 1 个五孔板，>15 个准备 2 个五孔板，每孔加入受精培养液 800 μL，盖矿物油 0.5 mL，置于 37 ℃、6%CO2 培养箱内平衡。

　　7.1.6 再次观测工作环境是否正常，预热 30 min 装卵泡液的捡卵皿。

　　7.1.7 与患者和临床医生当面核对患者信息，无误后签名。

　　7.2 捡卵

　　7.2.1 检查已平衡好的培养液，包括卵泡冲洗缓冲液、洗卵培养液和受精培养液是否备齐。

　　7.2.2 收集在试管内的卵泡液倒入捡卵皿内，形成一薄层液体，镜下观察 OCCC 是否存在，用巴斯德吸管吸起后在体式显微镜下确认。典型 OCCC 肉眼可见，为灰色透亮的粘液团，中央可见小白点，为卵母细胞和放射冠，直径 2mm～4mm。在体式显微镜下(20～50 倍)观察，确认粘液团内是否有卵母细胞存在，如有血凝块附于 OCCC 上，直接用巴斯德吸管将血凝块分离去除。将选出的卵子先置于含缓冲培养液的捡卵皿中暂存。

　　7.2.3 取卵结束后，取出平衡好的洗卵皿。更换巴斯德吸管后，将捡卵皿中的卵子转入洗卵皿外孔及中央孔中洗涤 2 次，再转入含受精培养液的培养皿中，置于 37℃ 、6%CO2 培养箱内培养。在记录表上记录取卵情况及卵子所放置培养箱编号，并在培养箱贴患者夫妇双方姓名标签。

　　7.3 授精

　　7.3.1 将优选后的精子密度调整至(1.0～2.0) ×106/mL，放置于 37 ℃ 、6%CO2 培养箱内备用。

　　7.3.2 体外培养 4 h～6 h 后进行体外受精，常规体外受精加入精子数量为( 1.0～2.0) ×105/mL。

　　7.3.3 取卵后4 h 将卵子从洗卵皿中转入受精培养皿，每个孔加 5 个卵子，加入调整好密度的精子共同培养。

　　7.3.4 如患者进行短时授精，精子、OCCC 体外受精后4 h 内去除颗粒细胞观察第二极体，如患者进行长时授精，在体外授精后 16 h～18 h 去除颗粒细胞观察卵子的受精情况。

　　7.4 观察受精和卵裂

　　授精后16 h～18 h观察受精情况，取卵后第2 d～3 d观察卵裂情况。

　　7.5 移植

　　7.5.1 鲜胚移植：在授精后 72h～74h，选择 1～2 枚 6～8 细胞期胚胎进行移植;有囊胚培养条件的患者，在取卵后 5 d～6 d 选择 1 枚囊胚移植。对于不适合移植的患者，宜第 3 d 行全胚冷冻或行囊胚培养后再将评级在 4BC 或 4CB 及以上的囊胚冷冻保存。

　　7.5.2 实验室移植操作如下：

　　a) 实验室操作人员、移植医生和护士核对手术患者信息;

　　b) 实验室操作人员双人核对患者信息及胚胎质量和数目后，实验室操作人员用一次性移植管吸取胚胎;

　　c) 记录移植过程中的异常情况：出血、粘液团、胚胎带出、移植困难等。

　　7.6 移植后处理

　　移植后剩余的可利用胚胎进行冷冻保存，或行囊胚培养后再冷冻保存。

　　8 注意事项

　　8.1 缩短体外操作的时间，整个操作过程无菌、快速，并避光，温度维持在 37℃。

　　8.2 取卵过程中，若发现异常，如未见卵母细胞，获卵数明显少于预测卵泡数，捡卵操作人员及时与采卵的临床医生沟通。

　　8.3 移植后是否有胚胎带出的情况处理：移植后实验室移植操作人员迅速将移植导管放入移植皿中反复吹吸，未发现胚胎残留，报告移植医生，移植操作结束;如发现有胚胎残留，重复以上移植操作。

　　9 操作记录

　　对IVF-ET操作过程的试剂及耗材，捡卵、授精、观察、移植等操作进行记录，并妥善保管。

　　参 考 文 献

　　[1] 卫生部关于修订人类辅助生殖技术与人类精子库相关技术规范、基本标准和伦理原则的通知(卫科教发{2003｝176号)

　　[2] 庄广伦.现代辅助生育技术[M].北京：人民卫生出版社,2005.

　　[3] 黄国宁.体外受精-胚胎移植实验室技术.北京：人民卫生出版社,2012.