T/GXAS 826-2024 家蚕抗血液型脓病性能测试技术规程

　　团

　　体

　　GXAS

　　标 准

　　T/GXAS 826—2024

　　家蚕抗血液型脓病性能测试技术规程

　　Tech in ical code of practice for performance testing of silkworm

　　resistance to Bombyx mori nucleopolyhedros is

　　2024 - 08 - 23 发布 2024 - 08 - 29 实施

　　广西标准化协会 发 布

　　前 言

　　本文件参照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

　　请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

　　本文件由广西壮族自治区蚕业技术推广站提出并宣贯。

　　本文件由广西标准化协会归口。

　　本文件起草单位：广西壮族自治区蚕业技术推广站、河池市蚕业技术推广站、广西农业工程职业技术学院。

　　本文件主要起草人：黄文功、安春梅、黄玲莉、刘艳伟、谭福洋、闭立辉、浦月霞、苏红梅、韦伟、黄红燕、黄扬玉、黄康东、覃龙伟、莫嘉凌、廖万波、杨小妹、蒋璇。

　　家蚕抗血液型脓病性能测试技术规程

　　1 范围

　　本文件界定了家蚕抗血液型脓病性能测试技术涉及的术语和定义，确立了家蚕抗血液型脓病性能测试的程序，规定了设施设备选择，以及家蚕饲养、接种材料准备、抽样、攻毒管理、发病调查、结果记录、消毒、饲育区选留、选留饲育区的饲养、上蔟采茧、调查制种及蚕种保护、冷藏、浸酸的操作指示，描述了测试过程信息的追溯方法。

　　本文件适用于家蚕抗血液型脓病性能的测试。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

　　DB45/T 83 种茧育养蚕技术规程

　　DB45/T 84 桑蚕种保护、冷藏、浸酸技术规程

　　3 术语和定义

　　下列术语和定义适用于本文件。

　　3.1

　　家蚕核型多角体 Bombyx mori nuclear polyhedral body

　　家蚕核型多角体病毒侵染家蚕后，在感染组织的细胞核内形成的多呈六角形十八面体的包埋病毒粒子的蛋白质晶体。

　　3. 2

　　攻毒 challenge test

　　用家蚕核型多角体病毒悬液浸泡桑叶后晾干表面水分，经口添食家蚕幼虫使易感个体感染发病的方法。

　　4 设施设备选择

　　4.1 选择配备有蚕架、蚕匾等附属蚕具以及温湿度调控设备、消毒机具的动物实验室。

　　4.2 选择配备有光学显微镜、低速离心机、血球计数板、纯水机、组织破碎仪、冰箱、移液枪、超净工作台、高压灭菌锅等设备及器材的病毒提取保存实验室。

　　5 测试流程

　　5.1 流程图见图1

　　图1 家蚕抗血液型脓病性能测试流程图

　　5.2 测试操作

　　5.2.1 家蚕饲养

　　待测家蚕品种(系) 的催青、收蚁、饲养按照DB45/T 83规定执行。

　　5.2.2 接种材料准备

　　将家蚕核型多角体配制成目的浓度悬液。将桑叶浸入病毒悬液中，充分浸渍均匀，取出摊开待桑叶晾干表面水分后备用。

　　5.2.3 抽样

　　待测试家蚕品种(系)及对照品种均在2龄起蚕饷食前抽样。每饲育区抽样30头置于样本饲喂盒，并附样本信息(包括蚕品种名或代号、区号、抽样数量等信息)的区片。

　　5.2.4 攻毒管理

　　将制备好的染毒叶切成3 cm×3 cm大小，每个样本饲喂3片。按照DB45/T 83规定设置蚕室温湿度，在第2餐饲喂前去除染毒叶残叶、蚕沙，更换垫纸，蚕体、蚕座撒新鲜石灰粉，改为每天饲喂正常桑叶3次。

　　5.2.5 发病调查

　　5.2.5.1 调查时间

　　攻毒后60 h开始至 3 龄起蚕结束。

　　5.2.5.2 诊断方法

　　以家蚕血液型脓病的典型病征结合光学显微镜镜检调查发病蚕、健康蚕数量。有不能入眠、环节肿胀发亮、狂躁爬行等病征的蚕计为发病蚕;能蜕皮进入 3 龄的蚕计为健康蚕。对不能确定病因的蚕，取血液用光学显微镜检查，观察到有核型多角体计入发病蚕。

　　5.2.5.3 发病率计算

　　发病率计算见公式(1)：

　　a ········································································· (1)

　　式中：

　　a——发病率,单位为百分比(%);

　　b——发病蚕头数，单位为头;

　　c——健康蚕头数,单位为头。

　　5.2.5.4 抗病判断

　　发病率≤30.00%的饲育区入选，发病率>30.00%的饲育区淘汰。

　　5.3 结果记录

　　准确记录测试结果。

　　5. 4 消毒

　　器材及实验室消毒按照DB45/T 83执行。

　　5.5 饲育区选留

　　根据测试结果选留发病率低的饲育区。

　　5.6 选留饲育区的饲养、上蔟采茧、调查制种按照DB45/T 83规定执行。

　　5.7 蚕种保护、冷藏、浸酸按照DB45/T 84规定执行。

　　6 测试记录

　　记录内容包括：测试的品种(系)、来源、区号、攻毒浓度、毒株名称、测试开始时间和结束时间、血液型脓病发病率、操作者签名等，记录保存2年以上。