中华人民共和国国家标准 GB31604.62—2025 食品安全国家标准食品接触材料及制品 N-亚硝胺类化合物迁移量和释放量的测定 2025-03-16发布2025-09-16实施中华人民共和国国家卫生健康委员会国家市场监督管理总局发布食品安全国家标准食品接触材料及制品 N-亚硝胺类化合物迁移量和释放量的测定 1 范围本标准规定了食品接触材料及制品中N-亚硝胺类化合物和N-亚硝胺可生成物的迁移量及释放量的测定方法。 本标准第一部分适用于食品接触用橡胶材料及制品中N-二甲基亚硝胺、N-亚硝基-N-甲基乙胺、 N-亚硝基二乙胺、N-亚硝基二异丙胺、N-亚硝基二正丙胺、N-亚硝基二异丁胺、N-亚硝基二正丁胺、 N-亚硝基哌啶、N-亚硝基吡咯烷、N-亚硝基吗啉、N-亚硝基-N-乙基苯胺、N-亚硝基-N-甲基苯胺、N- 亚硝基二异壬胺、N-亚硝基二环己基胺、N-亚硝基二苄胺等15种N-亚硝胺类化合物迁移量的测定,并且适用于食品接触用橡胶材料及制品中上述15种N-亚硝胺可生成物迁移量的测定。本标准第二部分适用于奶嘴中上述15种N-亚硝胺类化合物释放量的测定,并且适用于奶嘴中上述15种N-亚硝胺可生成物释放量的测定。 第一部分 N-亚硝胺类化合物和N-亚硝胺可生成物迁移量的测定第一法气相色谱-质谱法 2 原理迁移试验所得浸泡液中N-亚硝胺类化合物在碱性条件下经二氯甲烷萃取、浓缩后,采用气相色谱- 质谱仪(GC-MS)测定,外标法定量,获得直接迁移出的N-亚硝胺类化合物迁移量。 迁移试验所得浸泡液中N-亚硝胺可生成物,在酸性条件下与人工唾液中的亚硝酸盐反应生成N- 亚硝胺类化合物,反应生成的N-亚硝胺类化合物和直接迁移出的N-亚硝胺类化合物按上述步骤同步测定,获得N-亚硝胺可生成物和直接迁移出的N-亚硝胺类化合物二者迁移量之和。单种N-亚硝胺可生成物的迁移量由测得的二者迁移量之和减去直接迁移出的相应N-亚硝胺迁移量计算获得。 3 试剂与材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB 6682规定的一级水。 3.1 试剂 3.1.1 二氯甲烷(CH2Cl2):色谱纯。 3.1.2 浓盐酸(HCl)。 3.1.3 氢氧化钠(NaOH)。 3.1.4 无水乙醇(C2H6O):色谱纯。 1 GB31604.62—2025 3.1.5 冰醋酸(C2H4O2):优级纯。 3.1.6 碳酸氢钠(NaHCO3)。 3.1.7 氯化钠(NaCl)。 3.1.8 碳酸钾(K2CO3)。 3.1.9 亚硝酸钠(NaNO2)。 3.2 试剂配制 3.2.1 食品模拟物:按GB5009.156配制。 3.2.2 0.1mol/L盐酸溶液:按GB5009.156配制。 3.2.3 0.1mol/L氢氧化钠溶液:按GB5009.156配制。 3.2.4 1mol/L盐酸溶液:量取盐酸83mL缓慢加入500mL水中,待溶液冷却至室温后,转移至1L 容量瓶中,用水定容至刻度后,混匀。 3.2.5 5mol/L氢氧化钠溶液:称取5.0g氢氧化钠于聚乙烯或聚四氟乙烯塑料烧杯中,加250mL水溶解。冷却后,转移至塑料(PET除外)瓶中,待用。 3.2.6 人工唾液:按GB5009.156配制,或采购市售人工唾液。 3.3 标准品/物质 15种N-亚硝胺类化合物标准物质:纯度均>98%,具体信息见附录A 中表A.1,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。 3.4 标准溶液配制 3.4.1 15种N-亚硝胺类化合物混合标准储备液(100mg/L):准确称取15种N-亚硝胺类化合物标准物质各25mg(精确至0.1mg),用无水乙醇溶解后转移至250mL 棕色容量瓶中,用乙醇定容至刻度,混匀。将溶液转移至棕色玻璃容器内,-18℃避光保存,保存期6个月。 3.4.2 N-亚硝胺类化合物混合标准中间液(1.00mg/L):准确移取15种N-亚硝胺类化合物混合标准储备液(100mg/L)1.00mL于100mL棕色容量瓶中,用无水乙醇定容至刻度,混匀。将溶液转移至棕色玻璃容器内,-18℃避光保存,保存期3个月。 3.4.3 混合标准系列工作液:分别移取N-亚硝胺类化合物混合标准中间液(1.00 mg/L)0.50 mL、 1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL于6个10mL棕色容量瓶中,用无水乙醇定容至刻度,混匀。15种N-亚硝胺类化合物的质量浓度分别为0.0500 mg/L、0.100 mg/L、0.200 mg/L、 0.300mg/L、0.400mg/L、0.500mg/L的混合标准系列工作溶液。临用现配。 4 仪器和设备 4.1 气相色谱仪-质谱仪(GC-MS):配电子轰击源(EI源)。 4.2 电子天平:感量分别为0.1g、0.1mg。 4.3 电热鼓风干燥箱。 4.4 旋转蒸发仪:负压装置以及水冷设备。 4.5 氮吹仪。 4.6 pH 计:精度0.1。 4.7 微孔滤膜:尼龙,孔径0.22μm。 4.8 分液漏斗:150mL,配聚四氟乙烯塞。 2 GB31604.62—2025 5 分析步骤 5.1 迁移试验食品接触材料及制品按照GB31604.1和GB5009.156的要求进行迁移试验。迁移试验中应避免使用橡胶材质的耗材和工具,如密封圈、手套、切割工具等。迁移试验所得浸泡液恢复至室温后应尽快进行测试。 5.2 试液的制备 5.2.1 N-亚硝胺类化合物迁移量试液的制备 5.2.1.1 浸泡液的处理按表1要求依次将规定体积的浸泡液、5mol/L氢氧化钠溶液加入分液漏斗中,混匀;再加入表1 中规定体积的水和乙醇,混匀。 表1 N-亚硝胺类化合物迁移量试液相关试剂用量表浸泡液种类移取体积/mL 浸泡液5mol/L氢氧化钠溶液乙醇水水40.0 1.0 20.0 39.0 4%(体积分数)乙酸40.0 6.5 20.0 33.5 10%(体积分数)乙醇40.0 1.0 16.0 43.0 20%(体积分数)乙醇40.0 1.0 12.0 47.0 50%(体积分数)乙醇40.0 1.0 0.0 59.0 95%(体积分数)乙醇20.0 0.5 1.0 78.5 5.2.1.2 N-亚硝胺类化合物的萃取和浓缩向分液漏斗中加入二氯甲烷30.0mL,逆时针轻微摇晃漏斗,盖上盖子,剧烈振荡15s(必要时放气),打开盖子,静置分层,收集下层提取液。再用二氯甲烷30.0mL重复提取2次,合并提取液,摇匀。 将提取液于18℃~25℃水浴温度下,减压旋转蒸发浓缩至约5mL,氮吹至0.8mL~0.9mL,转移至 1.0mL棕色容量瓶中,用无水乙醇定容,经微孔滤膜过滤后待测。 5.2.2 N-亚硝胺类化合物和N-亚硝胺可生成物的迁移量之和试液的制备 5.2.2.1 浸泡液中N-亚硝胺可生成物的亚硝化反应及处理按表2要求移取规定体积的各浸泡液、溶剂和试剂。将迁移试验所得浸泡液置于150mL的具塞锥形瓶中,加入人工唾液。将锥形瓶置于电热鼓风干燥箱中,40 ℃恒温30min后取出,加入1mol/L 盐酸溶液,混匀。将锥形瓶重新置于电热鼓风干燥箱中,40 ℃反应30min后取出;加入5mol/L氢氧化钠溶液,混匀。待试液冷却至室温后,转移至分液漏斗中,加入表2中规定体积的水和乙醇,混匀。 3 GB31604.62—2025 表2 N-亚硝胺可生成物迁移量试液相关试剂用量表浸泡液种类移取体积/mL 浸泡液人工唾液1mol/L盐酸溶液5mol/L氢氧化钠溶液乙醇水水40.0 40.0 5.0 2.0 20.0 0.0 4%(体积分数)乙酸40.0 40.0 5.0 7.5 20.0 0.0 10%(体积分数)乙醇40.0 40.0 5.0 2.0 16.0 0.0 20%(体积分数)乙醇40.0 40.0 5.0 2.0 12.0 0.0 50%(体积分数)乙醇40.0 40.0 5.0 2.0 0.0 13.0 95%(体积分数)乙醇20.0 20.0 2.5 1.0 1.0 55.5 5.2.2.2 N-亚硝胺类化合物的萃取和浓缩同5.2.1.2。 5.2.3 空白试液的制备按5.1、5.2.1和5.2.2处理未与食品接触材料及制品接触的食品模拟物。 5.3 仪器参考条件 5.3.1 气相色谱参考条件气相色谱参考条件如下: a) 色谱柱:改性聚乙二醇色谱柱,30m×0.25mm(内径)×0.32μm(膜厚)或性能相当者; b) 进样口温度:240℃; c) 程序升温条件:初始温度60 ℃,保留2 min,以15 ℃/min升至82 ℃,以1 ℃/min升至 88℃,以15℃/min升至110℃,保留7min,再以15℃/min升至240℃,保留7min; d) 载气:氦气(纯度≥99.999%); e) 流速:1.2mL/min; f) 进样方式:不分流进样; g) 进样体积:1μL。 5.3.2 质谱参考条件质谱参考条件如下: a) 接口温度:250℃; b) 离子源温度:250℃; c) 电离方式:电子轰击源(EI源); d) 溶剂延迟:5min; e) 扫描模式:选择离子扫描(SIM),离子参数见附录B中表B.1。 5.4 标准曲线的绘制按照5.3所列仪器参考条件,对混合标准系列工作液依次进样测定。以混合标准系列工作液中N- 亚硝胺类化合物的质量浓度为横坐标,以对应的定量离子峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。15种N-亚硝胺类化合物标准工作溶液的色谱图见图B.1。 4 GB31604.62—2025 5.5 试样溶液的测定 5.5.1 定性测定按照所列的仪器参考条件,测定试样溶液和混合标准系列工作液,若试液与标准溶液中待测物的质量色谱峰保留时间的偏差在±0.5%范围内,并且在扣除背景后的试样质谱图中,所有定性离子均出现且信噪比≥3,而且定性离子的相对丰度与浓度相当的标准工作溶液中对应物质的相对丰度偏差不超过表3规定,则可判断试样中存在相应的待测物。 表3 定性时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度>50% <20%~50% <10%~20% ≤10% 最大允许偏差±20% ±25% ±30% ±50% 5.5.2 定量测定将试液和空白试液注入GC-MS中,得到各N-亚硝胺类化合物的峰面积,根据标准曲线得到试液中各N-亚硝胺类化合物的浓度。若各N-亚硝胺类化合物的含量超出标准曲线范围,试液可适当稀释后,重新测定。 5.5.3 N-亚硝胺类化合物的定性确证如果N-亚硝胺类化合物迁移总量超过产品标准的限量要求,应通过以下途径之一予以确认。 a) 利用N-亚硝胺类化合物受紫外线照射分解的性质,将剩余的测试溶液转入透明进样瓶中,置于365nm 紫外线下,距离灯管约24cm 的位置照射3h后,重新采用GC-MS测定。若照射后试液检出的N-亚硝胺类化合物对应色谱峰峰面积降低至原来峰面积的60%以下,则可确认为检出物质为相应的N-亚硝胺类化合物,否则可确定所检出化合物为假阳性。此方法不适用于N-亚硝基-N-甲基苯胺和N-亚硝基-N-乙基苯胺。 b) 参照5.5.3.a)的方法,采用气相色谱-热能分析仪法(GC-TEA)确认。 6 分析结果的表述 6.1 N-亚硝胺类化合物迁移量的计算 6.1.1 食品接触材料及制品中单种N-亚硝胺特定迁移量的计算(以mg/kg表示) 食品接触材料及制品中单种N-亚硝胺特定迁移量以mg/kg表示时,按式(1)进行计算。 Xa1 = (ca -ca0)×V1 V2 × V3 S1 ×F…………………………(1) 式中: Xa1———单种N-亚硝胺的特定迁移量,单位为毫克每千克(mg/kg); ca ———迁移量试液中单种N-亚硝胺的含量,单位为毫克每升(mg/L); ca0 ———迁移量空白试液中单种N-亚硝胺的含量,单位为毫克每升(mg/L); V1 ———迁移量试液的定容体积,单位为升(L); V2 ———检测时浸泡液的移取体积,单位为升(L); 5 GB31604.62—2025 V3 ———迁移试验中试样浸泡液的体积,单位为升(L); S1 ———迁移试验中试样与浸泡液接触的面积,单位为平方分米(dm2); F ———食品接触材料及制品在可预见使用情形下实际的接触面积与食品体积(质量)比(以下简称实际S/V),单位为平方分米每千克(dm2/kg)。各种液态食品通常密度以1kg/L计将其体积换算为质量来计算实际S/V。当实际S/V 已知时,F 即为可预见使用情形下的最大 S/V;当实际S/V 未知时,F 采用6dm2/kg,即6dm2 食品接触材料及制品接触1kg食品。 结果保留3位有效数字。 6.1.2 密封制品类食品接触材料及制品中单种N-亚硝胺特定迁移量的计算(以mg/件表示) 对盖子、密封圈、连接件等密封制品(以下简称密封制品)类食品接触材料及制品中单种N-亚硝胺特定迁移量以mg/件表示时,按式(2)计算,需注明采用的迁移试验方法、迁移试验中单个密封制品与食品模拟物接触的面积。 Xa2 = (ca -ca0)×V1 V2 × V3n…………………………(2) 式中: Xa2———单种N-亚硝胺的特定迁移量,单位为毫克每件(mg/件); ca ———迁移量试液中单种N-亚硝胺的含量,单位为毫克每升(mg/L); ca0 ———迁移量空白试液中单种N-亚硝胺的含量,单位为毫克每升(mg/L); V1 ———迁移量试液的定容体积,单位为升(L); V2 ———检测时浸泡液的移取体积,单位为升(L); V3 ———迁移试验中试样浸泡液的体积,单位为升(L); n ———浸泡用密封制品的数量,单位为件。 结果保留3位有效数字。 6.2 单种N-亚硝胺可生成物迁移量(以相应的N-亚硝胺计)的计算 6.2.1 食品接触材料及制品中单种N-亚硝胺可生成物迁移量的计算(以mg/kg表示) 6.2.1.1 食品接触材料及制品单种N-亚硝胺及其可生成物特定迁移量之和以mg/kg表示时,按式(3) 进行计算。 Xb1 = (cb -cb0)×V1 V2 × V3 S1 ×F…………………………(3) 式中: Xb1———单种N-亚硝胺及其可生成物的特定迁移量之和,单位为毫克每千克(mg/kg); cb ———5.2.2所得试液中单种N-亚硝胺的含量,单位为毫克每升(mg/L); cb0 ———5.2.2所得空白试液中单种N-亚硝胺的含量,单位为毫克每升(mg/L); V1 ———5.2.2所得试液的定容体积,单位为升(L); V2 ———检测时浸泡液的移取体积,单位为升(L); V3 ———迁移试验中试样浸泡液的体积,单位为升(L): S1 ———迁移试验中试样与浸泡液接触的面积,单位为平方分米(dm2); F ———实际S/V,单位为平方分米每千克(dm2/kg)。各种液态食品通常密度以1kg/L计将其体积换算为质量来计算实际S/V。当实际S/V 已知时,F 即为可预见使用情形下的最大 S/V;当实际S/V 未知时,F 采用6dm2/kg,即6dm2 食品接触材料及制品接触1kg 食品。 6 GB31604.62—2025 6.2.1.2 食品接触材料及制品单种N-亚硝胺可生成物特定迁移量以mg/kg表示时,按式(4)进行计算。 Xc1 =Xb1 -Xa1…………………………(4) 式中: Xc1———单种N-亚硝胺可生成物的特定迁移量,单位为毫克每千克(mg/kg); Xb1———单种N-亚硝胺及其可生成物的特定迁移总量,单位为毫克每千克(mg/kg); Xa1———单种N-亚硝胺的特定迁移量,单位为毫克每千克(mg/kg)。 结果保留3位有效数字。 6.2.2 密封制品类食品接触材料及制品中单种N-亚硝胺可生成物迁移量的计算(以mg/件表示) 6.2.2.1 当密封制品类食品接触材料及制品中单种N-亚硝胺及其可生成物特定迁移之和以mg/件表示时,按式(5)计算,需注明采用的迁移试验方法、迁移试验中单个密封制品与食品模拟物接触的面积。 Xb2 = (cb -cb0)×V1 V2 × V3n…………………………(5) 式中: Xb2———单种N-亚硝胺及其可生成物的特定迁移之和,单位为毫克每件(mg/件); cb ———5.2.2所得试液中单种N-亚硝胺的含量,单位为毫克每升(mg/L); cb0 ———5.2.2所得试液空白试液中单种N-亚硝胺的含量,单位为毫克每升(mg/L); V1 ———5.2.2所得试液的定容体积,单位为升(L); V2 ———检测时浸泡液的移取体积,单位为升(L); V3 ———迁移试验中试样浸泡液的体积,单位为升(L); n ———浸泡用密封制品的数量,单位为件。 6.2.2.2 密封制品类食品接触材料及制品单种N-亚硝胺可生成物特定迁移量以mg/件表示时,按式(6)进行计算。 Xc2 =Xb2 -Xa2…………………………(6) 式中: Xc2———单种N-亚硝胺可生成物的特定迁移量,单位为毫克每件(mg/件); Xb2———单种N-亚硝胺及其可生成物的特定迁移量之和,单位为毫克每件(mg/件); Xa2———单种N-亚硝胺的特定迁移量,单位为毫克每件(mg/件)。 结果保留3位有效数字。 6.3 N-亚硝胺类化合物迁移总量的计算 N-亚硝胺类化合物迁移总量为各种N-亚硝胺的迁移量之和。若某种N-亚硝胺迁移量低于其检出限,应记录为“未检出”或“ND”,其值以零处理。 6.4 N-亚硝胺可生成物迁移总量(以相应的N-亚硝胺类化合物计)的计算 N-亚硝胺可生成物迁移总量为各种N-亚硝胺可生成物迁移量之和。若某种N-亚硝胺可生成物迁移量低于其检出限,应记录为“未检出”或“ND”,其值以零处理。 7 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的20%。 7 GB31604.62—2025 8 检出限和定量限本方法对95%(体积分数)乙醇浸泡液中单种N-亚硝胺含量的检出限均为1.3μg/L,定量限均为 2.50μg/L,其他浸泡液中单种N-亚硝胺含量的检出限均为0.7μg/L,定量限均为1.25μg/L。在同种浸泡液中、指定的亚硝化条件下,若直接迁出的单种N-亚硝胺未检出时,单种N-亚硝胺可生成物(以相应的N-亚硝胺计)含量检出限和定量限与相应的N-亚硝胺类化合物含量的检出限和定量限相同。各 N-亚硝胺类化合物和N-亚硝胺可生成物迁移量的检出限和定量限按第6章计算。 9 其他试验过程中应遵循以下注意事项: a) 分析所用二氯甲烷和无水乙醇浓缩60倍后,不应检出任意一种N-亚硝胺类化合物(即信噪比 S/N <3); b) 各标准溶液配制时需在通风良好的环境下进行; c) 混合标准系列工作液按5.5.3的要求处理至少14h后废弃,其他高浓度标准溶液用水稀释至 0.5mg/L以下,按5.5.3的要求处理至少14h后废弃; d) 试验过程中应避免橡胶材质的物品(如手套、密封垫、切割工具等)带来的污染。 第二法气相色谱-热能分析仪法 10 原理迁移试验所得浸泡液中N-亚硝胺类化合物在碱性条件下经二氯甲烷萃取、浓缩后,采用气相色谱- 热能分析仪(GC-TEA)测定,外标法定量,获得直接迁移出的N-亚硝胺类化合物迁移量。 迁移试验所得浸泡液中N-亚硝胺可生成物,在酸性条件下与人工唾液中的亚硝酸盐反应生成N- 亚硝胺类化合物,反应生成的N-亚硝胺类化合物和直接迁移出的N-亚硝胺类化合物按上述步骤同步测定,获得N-亚硝胺可生成物和直接迁移出的N-亚硝胺类化合物二者迁移量之和。单种N-亚硝胺可生成物的迁移量由测得的二者迁移量之和减去直接迁移出的相应N-亚硝胺类化合物迁移量计算获得。 11 试剂与材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB 6682规定的一级水。 11.1 试剂同3.1。 11.2 试剂配制同3.2。 11.3 标准品/物质同3.3。 8 GB31604.62—2025 11.4 标准溶液配制 11.4.1 15种N-亚硝胺类化合物混合标准储备液(100mg/L):同3.4.1。 11.4.2 N-亚硝胺类化合物混合标准中间液(1.00mg/L):同3.4.2。 11.4.3 混合标准系列工作液:分别移取N-亚硝胺类化合物混合标准中间液(1.00mg/L)0.25mL、 0.50mL、1.00mL、2.50mL、5.00mL于5个10mL棕色容量瓶中,用无水乙醇定容至刻度,混匀。得到15种N-亚硝胺类化合物的质量浓度分别为0.0250mg/L、0.0500mg/L、0.100mg/L、0.250mg/L、 0.500mg/L的混合标准工作溶液。临用现配。 12 仪器和设备 12.1 气相色谱-热能分析仪(GC-TEA)。 12.2 其他同4.2~4.7。 13 分析步骤 13.1 迁移试验同5.1。 13.2 试液的制备同5.2。 13.3 仪器参考条件 13.3.1 气相色谱条件气相色谱参考条件如下: a) 色谱柱:改性聚乙二醇色谱柱,30m×0.25mm(内径)×0.32μm(膜厚)或性能相当者; b) 进样口温度:170℃; c) 程序升温条件:初始温度60 ℃,保留2 min,以15 ℃/min升至82 ℃,以1 ℃/min升至 88℃,以15℃/min升至140℃,保留7min,再以15℃/min升至240℃,保留7min; d) 载气:氮气(纯度≥99.999%); e) 流速:1.2mL/min; f) 进样方式:不分流进样; g) 进样体积:2μL。 13.3.2 热能分析仪条件热能分析仪参考条件如下: a) 接口温度:250℃; b) 热解室温度:500℃; c) 真空度:59.8Pa~66.5Pa; d) 氧气压力:13.79kPa; e) 臭氧水平:244。 9 GB31604.62—2025 13.4 标准曲线的绘制按照13.3所列的仪器参考条件,对混合标准系列工作液依次进样测定。以混合标准系列工作液中 N-亚硝胺类化合物的质量浓度为横坐标,以对应的峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。15种N-亚硝胺类化合物标准工作溶液的色谱图见附录C中图C.1。 13.5 试样溶液的测定 13.5.1 定性测定按照13.3所列的仪器参考条件,测定试样溶液和混合标准系列工作液,若试液与标准溶液中待测物色谱峰保留时间的偏差在±0.5%范围内,则可判断试样中存在相应的待测物。 13.5.2 定量测定将试液和空白试液注入GC-TEA 中,得到各N-亚硝胺类化合物的峰面积,根据标准曲线得到试液中各N-亚硝胺类化合物的浓度。若各N-亚硝胺类化合物的含量超出标准曲线范围,试液可适当稀释后,重新测定。 13.5.3 N-亚硝胺类化合物的定性确证同5.5.3b)。 14 分析结果的表述同第6章。 15 精密度同第7章。 16 检出限和定量限本方法对95%(体积分数)乙醇浸泡液中单种N-亚硝胺的检出限均为0.7μg/L,定量限均为1.25 μg/L,其他浸泡液中单种N-亚硝胺的检出限均为0.4μg/L,定量限均为0.625μg/L。在同种浸泡液中、指定的亚硝化条件下,若直接迁出的单种N-亚硝胺未检出时,单种N-亚硝胺可生成物(以相应的 N-亚硝胺计)含量检出限和定量限与相应的N-亚硝胺含量的检出限和定量限相同。各N-亚硝胺类化合物迁移量的检出限和定量限按第6章进行计算。 17 其他同第9章。 10 GB31604.62—2025 第二部分奶嘴中N-亚硝胺类化合物及N-亚硝胺可生成物释放量的测定第一法气相色谱-质谱法 18 原理释放量试液中N-亚硝胺类化合物在碱性条件下经二氯甲烷萃取、浓缩后,采用GC-MS测定,外标法定量,获得直接释放出的N-亚硝胺类化合物释放量。 释放量试液中N-亚硝胺可生成物,在酸性条件下与人工唾液中的亚硝酸盐反应生成N-亚硝胺类化合物,反应生成的N-亚硝胺类化合物和直接释放出的N-亚硝胺类化合物按上述步骤同步测定,获得 N-亚硝胺可生成物及N-亚硝胺类化合物的释放量之和。单种N-亚硝胺可生成物的释放量由二者释放量之和减去直接释放出的相应N-亚硝胺释放量计算获得。 19 试剂与材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB 6682规定的一级水。 19.1 试剂同3.1。 19.2 试剂配制同3.2。 19.3 标准品/物质同3.3。 19.4 标准溶液配制同3.4。 20 仪器和设备同第4章。 21 分析步骤 21.1 试样的预处理使用前有清洗或特殊处理要求的试样,按照标签或说明书上的要求进行清洗或处理。选择同一批次的奶嘴,制备2份试样,1份用于N-亚硝胺类化合物释放量的检测,另1份用于N-亚硝胺可生成物释放量的检测。每份试样均沿着主轴裁切切成近似对称的小块,称取10g(精确至0.1g)试样加入至烧杯中,加入300mL水,确保每片试样均完全浸入水中,煮沸10min。用镊子将试样从水中取出,并摇落多余的水,立即转入50mL磨口锥形瓶。 11 GB31604.62—2025 21.2 试液的制备 21.2.1 N-亚硝胺类化合物释放量试液的制备 21.2.1.1 浸泡液的制备与处理加入40mL人工唾液于磨口锥形瓶中,轻轻摇晃以确保每片试样均完全浸没在溶液中。将锥形瓶置于40℃电热鼓风干燥箱中,释放24h后取出,摇动3次,打开瓶塞,用镊子取出试样。加入1.0mL 5mol/L氢氧化钠溶液,摇匀。待试液冷却至室温之后转移至分液漏斗中,加入39mL水和20mL无水乙醇,摇匀静置。 21.2.1.2 N-亚硝胺类化合物的萃取和浓缩同5.2.1.2。 21.2.2 N-亚硝胺类化合物和N-亚硝胺可生成物的释放量之和试液的制备 21.2.2.1 浸泡液的处理加入40.0mL人工唾液于磨口锥形瓶中,轻轻摇晃以确保每片试样均完全浸没在溶液中。将锥形瓶置于40℃电热鼓风干燥箱中,释放24h后取出,摇动3次,打开瓶塞,用镊子取出试样。加入5.0mL 1mol/L盐酸溶液,摇动3次混匀。将锥形瓶重新置于电热鼓风干燥箱中,40℃反应30min后取出;加入2.0 mL5 mol/L 氢氧化钠溶液混匀,终止反应。待试液冷却至室温后转移至分液漏斗中,加入 33.0mL水、20.0mL无水乙醇,摇匀静置。 21.2.2.2 N-亚硝胺类化合物的萃取和浓缩同5.2.1.2。 21.2.3 空白试液的制备按21.2.1和21.2.2处理未与奶嘴接触的人工唾液。 21.3 仪器参考条件同5.3。 21.4 标准曲线的绘制同5.4。 21.5 试样溶液的测定同5.5。 22 分析结果的表述 22.1 试样中单种N-亚硝胺释放量的计算试样中单种N-亚硝胺的释放量,按式(7)进行计算: Md = (cd -cd0)×V ×1000 m ×1000…………………………(7) 12 GB31604.62—2025 Md ———单种N-亚硝胺的释放量,单位为毫克每千克(mg/kg); cd ———释放量试液中单种N-亚硝胺的含量,单位为毫克每升(mg/L); cd0 ———释放量空白试液中单种N-亚硝胺的含量,单位为毫克每升(mg/L); V ———释放量试液的定容体积,单位为毫升(mL); 1000———单位换算系数; m ———取样的质量,单位为克(g)。 结果保留3位有效数字。 22.2 试样中单种N-亚硝胺可生成物释放量(以相应的N-亚硝胺计)的计算 22.2.1 试样中单种N-亚硝胺及其可生成物释放量之和以mg/kg表示时,按式(8)进行计算。 Me = (ce -ce0)×V ×1000 m ×1000…………………………(8) Me ———单种N-亚硝胺及其可生成物的释放量之和,单位为毫克每千克(mg/kg); ce ———释放量之和试液中单种N-亚硝胺的含量,单位为毫克每升(mg/L); ce0 ———释放量之和空白试液中单种N-亚硝胺的含量,单位为毫克每升(mg/L); V ———释放量之和试液的定容体积,单位为毫升(mL); 1000———单位换算系数; m ———取样的质量,单位为克(g)。 22.2.2 试样中单种N-亚硝胺可生成物释放量以mg/kg表示时,按式(9)进行计算。 Mf=Me -Md…………………………(9) 式中: Mf ———单种N-亚硝胺可生成物的释放量,单位为毫克每千克(mg/kg); Me ———单种N-亚硝胺及其可生成物的释放量之和,单位为毫克每千克(mg/kg); Md ———单种N-亚硝胺的释放量,单位为毫克每千克(mg/kg)。 结果保留3位有效数字。 22.3 N-亚硝胺类化合物释放量总量的计算 N-亚硝胺类化合物释放总量为各种N-亚硝胺的释放量之和。若某种N-亚硝胺释放量低于其检出限,应记录为“未检出”或“ND”,其值以零处理。 22.4 N-亚硝胺可生成物释放量总量(以相应的N-亚硝胺类化合物计)的计算 N-亚硝胺可生成物释放总量为各种N-亚硝胺可生成物释放量之和。若某种N-亚硝胺可生成物释放量低于其检出限,应记录为“未检出”或“ND”,其值以零处理。 23 精密度同第7章。 24 检出限和定量限当取样量为10g、定容体积为1.0mL时,本方法对15种N-亚硝胺类化合物释放量的检出限均为 2.5μg/kg,定量限均为5.00μg/kg。在指定的亚硝化条件下,若直接释放出的单种N-亚硝胺未检出时,单种的N-亚硝胺可生成物(以相应的N-亚硝胺计)的释放量检出限均为2.5μg/kg,定量限均为 5.00μg/kg。 13 GB31604.62—2025 25 其他同第9章。 第二法气相色谱-热能分析仪法 26 原理释放量试液中N-亚硝胺类化合物在碱性条件下经二氯甲烷萃取、浓缩后,采用GC-TEA 测定,外标法定量,获得直接释放出的N-亚硝胺类化合物释放量。 释放量试液中N-亚硝胺可生成物,在酸性条件下与人工唾液中的亚硝酸盐反应生成N-亚硝胺类化合物,反应生成的N-亚硝胺类化合物和直接释放出的N-亚硝胺类化合物按上述步骤同步测定,获得 N-亚硝胺可生成物及N-亚硝胺类化合物的释放量之和。单种N-亚硝胺可生成物的释放量由二者释放量之和减去直接释放出的相应N-亚硝胺释放量计算获得。 27 试剂与材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB 6682规定的一级水。 27.1 试剂同3.1。 27.2 试剂配制同3.2。 27.3 标准品/物质同3.3。 27.4 标准溶液配制同11.4。 28 仪器和设备同第12章。 29 分析步骤 29.1 试样的预处理同21.1。 14 GB31604.62—2025 29.2 试液的制备同21.2。 29.3 仪器参考条件同13.3。 29.4 标准曲线的绘制同13.4。 29.5 试样溶液的测定同13.5。 30 分析结果的表述同第22章。 31 精密度同第7章。 32 检出限和定量限当取样量为10g、定容体积为1.0mL时,本方法对15种N-亚硝胺类化合物释放量的检出限均为 1.3μg/kg,定量限均为2.50μg/kg。在指定的亚硝化条件下,若直接释放出的单种N-亚硝胺未检出时,单种的N-亚硝胺可生成物(以相应的N-亚硝胺计)的释放量检出限均为1.3μg/kg,定量限均为 2.50μg/kg。 33 其他同第9章。 15 GB31604.62—2025 附录 A 15种N-亚硝胺类化合物标准物质信息 15种N-亚硝胺类化合物标准物质信息见表A.1。 表A.1 15种N-亚硝胺类化合物的中英文名称、英文缩写、CAS号和分子式序号名称英文名称英文缩写CAS号分子式 1 N-二甲基亚硝胺N-Nitrosodimethylamine NDMA 62-75-9 C2H6N2O 2 N-亚硝基-N-甲基乙胺N-Methyl-N-nitrosoethylamin NMEA 10595-95-6 C3H8N2O 3 N-亚硝基二乙胺N-Nitrosodiethylamine NDEA 55-18-5 C4H10N2O 4 N-亚硝基二异丙胺N-Nitrodiisopropylamine NDiPA 601-77-4 C6H14N2O 5 N-亚硝基二正丙胺N-Nitrosodipropylamine NDPA 621-64-7 C6H14N2O 6 N-亚硝基二异丁胺N-nitrosodiisobutylamine NDiBA 997-95-5 C8H18N2O 7 N-亚硝基二正丁胺N-Nitrosodibutylamine NDBA 924-16-3 C8H18N2O 8 N-亚硝基哌啶N-Nitrosopiperidine NPIP 100-75-4 C5H10N2O 9 N-亚硝基吡咯烷N-Nitrosopyrrolidine NPYR 930-55-2 C4H8N2O 10 N-亚硝基吗啉N-Nitrosomorpholine NMOR 59-89-2 C4H8N2O2 11 N-亚硝基-N-乙基苯胺N-ethyl-N-phenylnitrousamide NEPhA 612-64-6 C8H10N2O 12 N-亚硝基-N-甲基苯胺N-methyl-N-phenylnitrousamide NMPhA 614-00-6 C7H8N2O 13 N-亚硝基二异壬胺N-nitrosodiisononylamine NDiNA 1207995-62-7 C18H38N2O 14 N-亚硝基二环己基胺N-nitrosodicyclohexylamine NDCHA 947-92-2 C12H22N2O 15 N-亚硝基二苄胺N-Nitrosodibenzylamine NDBzA 5336-53-8 C14H14N2O 16 GB31604.62—2025 附录 B N-亚硝胺类化合物的选择离子信息及典型GC-MS谱图 B.1 15种N-亚硝胺类化合物GC-MS法选择离子信息见表B.1。 表B.1 15种N-亚硝胺类化合物定性和定量离子信息汇总表序号名称英文缩写定量离子(m/z) 定性离子 (m/z) 1 N-二甲基亚硝胺NDMA 74 42、43、75 2 N-亚硝基-N-甲基乙胺NMEA 88 42、43、56、57 3 N-亚硝基二乙胺NDEA 102 42、44、56、57 4 N-亚硝基二异丙胺NDiPA 130 43、58、70、88 5 N-亚硝基二正丙胺NDPA 130 43、58、70、113 6 N-亚硝基二异丁胺NDiBA 84 43、57、115、158 7 N-亚硝基二正丁胺NDBA 84 43、57、116、158 8 N-亚硝基哌啶NPIP 114 42、55、56、84 9 N-亚硝基吡咯烷NPYR 100 41、43、69、70 10 N-亚硝基吗啉NMOR 116 42、56、57、86 11 N-亚硝基-N-乙基苯胺NEPhA 121 77、79、106、107 12 N-亚硝基-N-甲基苯胺NMPhA 106 51、77、79、107 13 N-亚硝基二异壬胺NDiNA 169 44、57、113、225 14 N-亚硝基二环己基胺NDCHA 83 55、98、129、210 15 N-亚硝基二苄胺NDBzA 91 65、181、226 B.2 15种N-亚硝胺类化合物混合标准工作液的典型GC-MS总离子流图见图B.1。 17 GB31604.62—2025 标引序号说明: 1 ———NDMA; 2 ———NMEA; 3 ———NDEA; 4 ———NDiPA; 5 ———NDPA; 6 ———NDiBA; 7 ———NDBA; 8 ———NMPhA; 9 ———NEPhA; 10———NPIP; 11———NPYR; 12———NMOR; 13———NDiNA; 14———NDCHA; 15———NDBzA。 图B.1 乙醇中15种N-亚硝胺类化合物混合标准工作液的GC-MS总离子流色谱图(5.00mg/L) 18 GB31604.62—2025 附录 C 气相色谱-热能分析色谱图 15种N-亚硝胺类化合物混合标准工作液的典型GC-TEA 色谱图见图C.1。 标引序号说明: 1 ———NDMA; 2 ———NMEA; 3 ———NDEA; 4 ———NDiPA; 5 ———NDPA; 6 ———NDiBA; 7 ———NDBA; 8 ———NPIP; 9 ———NPYR; 10———NMOR; 11———NEPhA; 12———NMPhA; 13———NDiNA; 14———NDCHA; 15———NDBzA。 图C.1 乙醇中N-亚硝胺类化合物混合标准工作液的GC-TEA 色谱图(0.25mg/L) 19 GB31604.62—2025
