中华人民共和国水产行业标准
SC/T 7249—2025
大口黑鲈蛙病毒检测方法
Detection methods for largemouth bass ranavirus
2025-12-09 发布
2026-05-01 实施
中华人民共和国农业农村部发布
前言
本文件按照 GB/T 1 .1—2020« 标准化工作导则第 1 部分 : 标准化文件的结构和起草规则»的规定起草 .
请注意本文件的某些内容可能涉及专利 . 本文件的发布机构不承担识别专利的责任 .
本文件由农业农村部渔业渔政管理局提出 .
本文件由全国水产标准化技术委员会水产养殖病害防治分技术委员会(SAC/TC 156/SC 11)归口 .
本文件起草单位 :浙江省淡水水产研究所、全国水产技术推广总站、华东理工大学、中国检验检疫科学研究院、浙江省水产技术推广总站 .
本文件主要起草人 :潘晓艺、蔺凌云、张翔、陈静、蔡晨旭、沈锦玉、王启要、王娜、姚嘉赟、朱凝瑜、袁雪梅、黄雷、彭先启、步夏莲、黄小红、尹文林、梁倩蓉 .
大口黑鲈蛙病毒检测方法
1 范围
本文件描述了大口黑鲈蛙病毒检测的试剂和材料、仪器设备、主要临床症状、样品、病毒分离、套式PCR 检测、qPCR 检测及综合判定的方法。
本文件适用于大口黑鲈蛙病毒的检测 ,及其引起相关疾病的流行病学调查、检疫和监测。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中 ,注日期的引用文件 ,仅该日期对应的版本适用于本文件 ; 不注日期的引用文件 , 其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 18088 出入境动物检疫采样
SC/T 7011 .1 水生动物疾病术语与命名规则第 1 部分 :水生动物疾病术语
SC/T 7011 .2 水生动物疾病术语与命名规则第 2 部分 :水生动物疾病命名规则
SC/T 7016 .1 鱼类细胞系第 1 部分 :胖头鱼岁肌肉细胞系(FHM)
SC/T 7016 .5 鱼类细胞系第 5 部分 :鲤上皮瘤细胞系(EPC)
SC/T 7103 水生动物产地检疫采样技术规范
3 术语和定义
SC/T 7011 .1 和 SC/T 7011 .2 界定的术语和定义适用于本文件。
4 缩略语
下列缩略语适用于本文件。
BHQ:黑洞淬灭剂(black hole quencher)
bp:碱基对(base pair)
CPE:细胞病变效应(cytopathic effect)
Ct:阈值循环数(cycle_threshold)
DNA:脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid)
dNTPs:脱氧核糖核苷三磷酸混合物(deoxy_ribonucleoside triphosphate mixture)
EDTA: 乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraacetic acid)
EPC:鲤上皮瘤细胞系(epitheliomapapulosum cyprinicellline)
FHM :胖头鱼岁肌肉细胞系(fathead minnow muscle cellline)
LMBV:大口黑鲈蛙病毒(largemouth bass ranavirus)
M199 :培养液 199 (medium 199)
PCR:聚合酶链式反应(polymerase chain reaction)
qPCR:实时荧光定量 PCR(quantitative real_time PCR)
SDS:十二烷基硫酸钠(sodium dodecylsulfate)
Taq:水生栖热菌(Thermusaquaticus)
TE:Tris盐酸和 EDTA(Tris . HCl_EDTA)
Tris:三羟甲基氨基甲烷(trishydroxymethylaminomethane)
6__FAM :6__羧基荧光素(6__fluoresceinamidite)
5 试剂和材料
除非另有说明 ,在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和蒸馏水或去离子水或相当纯度的水。
5 .1 Tris饱和酚(pH≥7 .8)。
5 .2 无水乙醇。
5 .3 Taq DNA 聚合酶(5 U/μL) :商品化试剂 , - 20 ℃保存。
5 .4 Hot_StartTaq DNA 聚合酶(5 U/μL) :商品化试剂 , - 20 ℃保存。
5 .5 dNTPs(各 2 .5 mmol/L) :商品化试剂 , - 20 ℃保存。
5 .6 10×PCR缓冲液(无 Mg2+) :商品化试剂 , - 20 ℃保存。
5 .7 MgCl2(25 mmol/L) :商品化试剂 , - 20 ℃保存。
5 .8 DNA Marker:相对分子质量大小在 100 bp~ 2 000 bp范围 ,商品化试剂 , - 20 ℃保存。
5 .9 6×载样缓冲液 :商品化试剂 ,4 ℃保存。
5 .10 核酸染料 :商品化试剂 ,4 ℃保存。
5 .1 1 鲤上皮瘤细胞系(EPC) :符合 SC/T 7016 .5 的规定。
5 .12 胖头鱼岁肌肉细胞系(FHM) :符合 SC/T 7016 .1 的规定。
5 .13 孵育液 :含有 1 000 IU/mL青霉素和 1 000μg/mL链霉素的 M199 培养液 ,4 ℃保存。
5 .14 维持液 :含有 2% 新生牛血清的 M199 培养液 ,4 ℃保存。
5 .15 酚/氯仿/异戊醇混合液 :将 Tris饱和酚、氯仿、异戊醇按体积比 25 ∶ 24 ∶ 1 混匀 ,4 ℃保存。
5 .16 氯仿/异戊醇混合液 :将氯仿、异戊醇按体积比 24 ∶ 1 混匀 ,4 ℃保存。
5 .17 TE缓冲液 :按附录 A 中 A.1 的要求配制。
5 .18 抽提缓冲液 :按 A.2 的要求配制。
5 .19 蛋白酶 K:按 A.3 的要求配制。
5 .20 10 mol/L乙酸铵 :按 A.4 的要求配制。
5 .21 50×电泳缓冲液 :按 A.5 的要求配制。
5 .22 1×电泳缓冲液 :按 A.6 的要求配制。
5 .23 套式 PCR 引物 :10 μmol/L, - 20 ℃保存。 其中 ,第一步 PCR 引物 F1 和 R1 ,扩增 967 bp片段 ;第
引物 F1 :5 ,_TCTCGCCACTTATGACAGCCTT_3 ,;
引物 R1 :5 ,_GGGCTCCAGGACGGTGTTAC_3 ,;
引物 F2 :5 ,_TATGTGCTCAACTCTTGGCTGGTC_3 ,;
引物 R2 :5 ,_CCACGATKGGCTTGACTTCTCC_3 ,,K 为简并碱基(K:G/T)。
5 .24 qPCR引物 : 10 μmol/L, - 20 ℃保存。 扩增引物分别为 LMBVq102F 和 LMBVq102R, 探针为
LMBVq102F:5 ,_ACTGGCCACCACCTCTACTC_3 ,;
LMBVq102R:5 ,_AGACACGTTGATGCTTGCGT_3 ,;
LMBVqTP:6__FAM_ACGCCCTGAGCCTCAACGATCC_BHQ1。
5 .25 阳性对照 :感染 LMBV 的细胞悬液或组织匀浆液 , - 80 ℃保存。
5 .26 阴性对照 :未感染 LMBV 的细胞悬液或组织匀浆液 , - 80 ℃保存。
5 .27 空白对照 :蒸馏水。
6 仪器设备
6 .1 组织研磨器。
6 .2 生物安全柜 .
6 .3 生化培养箱 .
6 .4 倒置显微镜 .
6 .5 高速冷冻离心机 :最高离心力在 12 000 g 以上 .
6 .6 水浴锅或金属浴 .
6 .7 涡旋振荡器 .
6 .8 普通冰箱 .
6 .9 超低温冰箱 .
6 .10 PCR仪 .
6 .1 1 实时荧光定量 PCR仪 :具有 FAM 荧光检测通道 .
6 .12 电泳仪 .
6 .13 平电泳槽 .
6 .14 紫外观察仪或凝胶成像仪 :波长范围 280 nm~ 320 nm.
6 .15 电炉或微波炉 .
6 .16 微量移液器 .
7 主要临床症状
不同养殖期病鱼症状 :仔鱼期腹鳍基部出血 ,尾柄出血或烂尾(见附录 C 中图 C.1) ;稚鱼期体表大量斑点状溃疡灶 ,头部或鳃颊红肿出血、溃烂(见图 C.2) ;幼鱼期和成鱼期体表出血、肌肉溃疡(见图 C.3) .
8 样品
8 .1 采样对象
大口黑鲈(Micropterussalmoides)、鳜 (Sinipercachuatsi)、乌鳢(Channaargus)、花鲈(Lateolabrax maculatus)、太阳鱼(Lepomisgibbosus)等易感宿主 .
8 .2 采样部位
体表用清水冲洗 ,再用 75%乙醇擦拭后 ,体长 ≤2 cm 的鱼 , 去眼去尾去除卵黄囊后取整条(尾)鱼 ;
2 cm<体长<4 cm 的鱼 ,去头去尾后取整条(尾)鱼 ;4 cm≤体长 ≤6 cm 的鱼 ,取内脏 ;体长 >6 cm 的鱼 ,取肝、脾、肾和心 . 所取样品分别置于 1 .5 mL离心管中 ,宜立即执行第 9 章病毒分离 ,或/和进行 DNA提取操作 . 如不能立即进行病毒分离 ,应 - 80 ℃保存备用 .
8 .3 采样数量
出入境动物检疫采样按 GB/T 18088 的规定执行 ,其他采样按 SC/T 7103 的规定执行 .
8 .4 保存和运输
活鱼样品运送至实验室 ,及时取样 ;组织样品 0 ℃ ~4 ℃低温状态运送至实验室 ;若运送时间超过 24 h,采用干冰进行运送 .
9 病毒分离
9 .1 样品处理
将样品置于孵育液(5 .13) 中使用组织研磨器(6 .1)匀浆 ,并按 1 ∶ 10 的质量体积比稀释 ,组织稀释液于 (25±1) ℃下孵育 2 h~4 h,或 4 ℃下孵育过夜 . 4 000 g 离心 20 min,收集上清液 ,用于接种细胞 .
9 .2 细胞准备
用含 10%新生牛血清的 M199 培养液培养 EPC(5 .11)或 FHM(5 .12)等敏感细胞系 ,传代消化 ,接种于 96 孔细胞培养板中 ,每孔接种 200 μL,25 ℃培养长至细胞单层后用于病毒接种 .
9 .3 病毒接种与观察
9 .3 .1 对 9 .1 获得的上清液用孵育液再做 2 次 10 倍稀释 ,获得 1 ∶ 100 和 1 ∶ 1 000 稀释度的稀释液 .
9 .3 .2 然后将 1 ∶ 10、1 ∶ 100 和 1 ∶ 1 000 3 个稀释度的稀释液分别接种到 9 .2 准备好的生长不足 24 h的 EPC或 FHM 单层细胞上 ,每个稀释度至少设 2 孔 ,每孔接种 100 μL. 同时设置阳性对照(5 .25)和阴性对照(5 .26) ,各 2 孔 .
9 .3 .3 (25±1) ℃吸附 1 h后 ,加入细胞维持液(5 .14) ,置于(25±1) ℃培养 .
9 .3 .4 每日用倒置显微镜(6 .4)检查 ,若出现 CPE,则进行套氏 PCR 或 qPCR检测 ,若连续 10 d未出现CPE,则还需盲传 1 次 .
9 .3 .5 盲传时 ,将 9 .3 .4 未出现 CPE 的细胞单层培养物冻融 1 次 , 以 4 000 g,4 ℃离心 20 min, 收集上清液 . 将上清液接种到 9 .2 的细胞单层 ,继续置于(25±1) ℃培养 ,倒置显微镜观察 . 同时分别设置阳性对照和阴性对照 ,各 2 孔 .
9 .3 .6 当细胞出现 CPE时 ,宜立即进行套氏 PCR或 qPCR检测 .
9 .4 结果判定
9 .4 .1 若阳性对照出现 CPE,且阴性对照未出现 CPE,则判定检测有效 .
9 .4 .2 如果样品经接种细胞和盲传后均没有 CPE 出现 ,则病毒分离结果为阴性 .
9 .4 .3 如果样品经接种细胞或盲传后出现 CPE,见附录 D 中图 D.1 和图 D.2 ,则病毒分离结果为阳性 ,并进行下一步检测 .
10 套式 PCR检测
10 .1 DNA 的提取
10 .1 .1 收集出现 CPE 的病变细胞 , 或取 30 mg~ 50 mg研磨后的鱼组织 , 加入 500 μL的抽提缓冲液(5 .18) ,充分研磨 ,37 ℃温浴 1 h. 提取过程同时设置阳性对照(5 .25)、阴性对照(5 .26) .
10 .1 .2 加入 2 .5 μL的 20 mg/mL蛋白酶 K(5 .19) ,至终浓度 100 μg/mL,混匀后置于 50 ℃水浴 3 h,不时旋动 .
10 .1 .3 将溶液冷却至室温 ,加入等体积 Tris饱和酚(5 .1) , 涡旋混匀后 ,置室温 10 min, 于 10 000 g 离心 5 min分离两相 .
10 .1 .4 水相移至一新 1 .5 mL离心管中 ,加入等体积酚/氯仿/异戊醇混合液(5 .15) , 涡旋混匀后 ,置室温 10 min,于 10 000 g 离心 5 min分离两相 .
10 .1 .5 水相移至一新 1 .5 mL离心管中 , 加入等体积氯仿/异戊醇混合液 (5 .16) , 涡旋混匀后 , 置室温10 min,于 10 000 g 离心 5 min分离两相 .
10 .1 .6 水相移至一新 1 .5 mL离心管中 ,加入 100 μL 10 mol/L乙酸铵(5 .20) ,混匀后 ,再加入两倍体积预冷无水乙醇(5 .2)( - 20 ℃)混匀 , - 20 ℃放置 2 h. 10 000 g 离心 10 min,弃上清 .
10 .1 .7 用 70%乙醇洗涤沉淀 2 次 ,每次 10 000 g 离心 5 min,倾去上清 ,沉淀于室温静置 3 min~ 5 min,充分晾干 .
10 .1 .8 加入 100 μL灭菌去离子水溶解 DNA.
10 .1 .9 若 DNA样品需要保存 ,可溶解于 100 μLTE缓冲液(5 .17) 中并保存于- 20 ℃ .
10 .1 .10 也可采用同等抽提效果的其他方法或等效商品化 DNA抽提试剂盒 .
10 .2 第一步 PCR扩增
10 .2 .1 按照表 1 的要求 ,在洁净区 ,加入除 Taq DNA 聚合酶以外的各项试剂 ,配制成预混物 ,分装后-
到 0 .2 mL PCR管中 . 分别加入各样品的模板 DNA(浓度 : 10 ng/μL~ 500 ng/μL)1 μL, 同时设阳性对
照、阴性对照和空白对照(5 .27) .
也可采用等效的商品化 PCR试剂盒 .
表
第一步
PCR反应预混物所需试剂组成
10 .2 .2 将上述加有 DNA 模板的 PCR 管放入 PCR 仪 (6 .10)后 , 按以下程序进行第一步 PCR 扩增 : 95 ℃ 3 min;95 ℃ 30 s、61 ℃ 30 s、72 ℃ 60 s,35 个循环;72 ℃ 5 min;4 ℃保温 . PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳分析 .
10 .3 第二步
对于第一步 PCR扩增无目的条带的样品 ,进行第二步 PCR 扩增 . 按照表 2 的要求 ,在洁净区 ,加入
AD的,, , ,.L. ,, 相一
PCR反应产物作为第二步 PCR反应的模板 ,各 1 μL. 在 PCR 仪 (6 .10) 中进行扩增 : 95 ℃ 3 min; 95 ℃ 30 s、61 ℃ 30 s、72 ℃ 40 s,35 个循环;72 ℃ 5 min;4 ℃保温 . PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳分析 .
也可采用等效的商品化 PCR试剂盒 .
表 2 第二步 PCR反应预混物所需试剂组成
10 .4 琼脂糖凝胶电泳及测序
10 .4 .1 使用 1×电泳缓冲液(5 .22)配制 2%的琼脂糖凝胶 , 待凝胶冷却至低于 60 ℃时 , 加入核酸染料(5 .10) ,摇匀 . 制备琼脂糖凝胶 .
10 .4 .2 将 5 μLPCR反应产物与 1 μL 6×载样缓冲液 (5 .9)混匀后加入加样孔中 . 同时设立 DNA Marker(5 .8)标准分子量对照 .
10 .4 .3 在 1×电泳缓冲液(5 .22) 中 , 1 V/cm~ 5 V/cm 的电压下电泳 . 当载样缓冲液中溴酚蓝指示剂的色带迁移至琼脂糖凝胶的 2/3 处时停止电泳 ,将凝胶置于紫外观察仪或凝胶成像仪下观察或拍照 .
10 .4 .4 如果观察到预期大小条带 ,对检测样品的 PCR扩增产物进行测序 .
10 .5 结果判定
10 .5 .1 阳性对照第一步 PCR后在 967 bp处和第二步 PCR后在 475 bp处有条带 , 阴性对照和空白对照在 967 bp和 475 bp处均无条带 ,检测有效 .
10 .5 .2 检测样品第一步 PCR后在 967 bp处有条带 , 和/或第二步 PCR 后在 475 bp处有条带 ,且 PCR产物测序结果与参考序列(见附录 B)一致性 >97% ,判定为套式 PCR检测结果阳性 .
10 .5 .3 检测样品第一步 PCR后在 967 bp处无条带且第二步 PCR 后在 475 bp处无条带 ,判定为套式
PCR检测结果阴性。
1 1 qPCR检测
1 1 .1 DNA提取按 10 .1 操作。
1 1 .2 反应体系配制
阳性对照、阴性对照和空白对照。 加样时在加样区宜按照空白对照、阴性对照、待检样品、阳性对照的顺序
分别加入 1 μL模板 ,轻弹混匀。
也可采用同等效果的商业化探针法 qPCR试剂盒代替。
表 3 qPCR的反应预混物所需试剂
1 1 .3 反应条件
将加好模板的 PCR管从冰盒中直接移到实时荧光定量 PCR 仪 (6 .11) 中 , 反应程序 : 95 ℃ 5 min; 95 ℃ 10 s,60 ℃ 30 s,共 40 个循环 ,每次循环收集一次 FAM 荧光信号。
1 1 .4 结果判定
1 1 .4 .1 阳性对照 Ct值 ≤37 ,并出现典型 S形扩增曲线 ; 阴性对照和空白对照无 Ct值 , 或 Ct值 >37 且无典型 S形扩增曲线 ,则检测有效。
1 1 .4 .2 样品扩增后 ,Ct值 ≤37 ,并出现典型 S形扩增曲线 ,结果判定为 qPCR检测结果阳性。
1 1 .4 .3 样品扩增后 ,37<样品的 Ct值 ≤40 时 ,应对样品再次检测。 再次检测时加入 8 μL模板 ,并相应减少去离子水的体积 ,若样品的 Ct值 ≤37 ,且出现典型的 S形扩增曲线 ,判定 qPCR检测结果为阳性 ,否则为阴性。
1 1 .4 .4 样品扩增后 ,无典型 S形扩增曲线 ,结果判定为 qPCR 阴性。
12 综合判定
易感宿主样品的检测结果符合以下任一项 ,判定为大口黑鲈蛙病毒检测阳性 :
a) 有临床症状 ,组织套式 PCR 和/或 qPCR检测结果为阳性 ;
b) 病毒分离结果阳性 ,病变细胞套式 PCR 和/或 qPCR检测结果为阳性 ;
c) 组织套式 PCR 和组织 qPCR检测结果都为阳性。
附录 A
(规范性)
试剂配方
A.1 TE缓冲液(pH 8.0)
1 mol/LTris . HCl(pH 8 .0) 10 mL
0 .5 mol/L EDTA(pH 8 .0) 2 mL加水定容至 1 000 mL后高压蒸气灭菌 ,4 ℃储存。
A.2 抽提缓冲液
1 mol/LTris . HCl(pH 8 .0) 1 mL
0 .5 mol/L EDTA(pH 8 .0) 20 mL
1 mg/mL RNA酶 2 mL
10% SDS 5 mL
加水定容至 100 mL后混匀 ,室温储存。
A.3 20 mg/mL 蛋白酶 K
蛋白酶 K 20 mg
水 1 mL
溶解后分装于无菌离心管中(0 .25 mL/管) , - 20 ℃下保存。
A.4 10 mol/L乙酸铵
乙酸铵 77 g
水 30 mL
加水定容至 100 mL,经 0 .45 μm 滤膜过滤除菌。 4 ℃储存。
A.5 50×电泳缓冲液
Tris 242 g
0 .5 mol/L EDTA(pH 8 .0) 242 g
冰乙酸 57 .1 mL
加水定容至 1 000 mL后室温储存。
A.6 1 × 电泳缓冲液
50×电泳缓冲液 20 mL
加水定容至 1 000 mL室温储存。
附录 B(资料性)
LMBV检测方法检测产物序列、引物及探针的位置
TCTCGCCACTTATGACAGCCTTGACAAAGCGCTGTACGGTGGAAAAGATGCAACTACTTATTTC
F1
GTCAAAGAGCATTATCCCGTGGGTTGGTTTACCAAACTGCCTACGGCTGCCACAAAAACTTC TGGTACGCCTGCTTTCGGGCAGCACTTTTCCGTAGGAGTGCCCAGGTCGGGCGACTATGTGCTC AACTCTTGGCTGGTCCTCAAGACCCCCCAGATTAAACTGCTGGCGGCCAACCAGTTTAACAATG
F2
ACGGTACCATCAGATGGACCAAAAATCTCATGCACAACGTTGTGGAGCACGCCGCACTCTCG TTCAACGAGATTCAGGCCCAGCAGTTTAACACTGCTTTCCTGGACGCCTGGAACGAGTACACC ATGCCCGAGGCCAAGCGCATCGGCTACTACAACATGATTGGCAACACTAGCGATCTCGTCAAT CCCGCCCCCGCCACCGGTCAAGCAGGAGCTAGGGTCCTGCCCGCCAAAAACCTTGTCCTTCCTC TCCCCTTCTTTTTCGGCAGAGACAGCGGGCTGGCCCTGCCTACAGTCACCCTGCCTTACAACGA AATTAGAATCACCATCAGCCTGAGATCCATTCAGGATCTCCTGATTCTTCAGCACAAGACGA CCGGAGAAGTCAAGCCCATCGTGGCCACAGATCTGGAAGGAGGTCTCCCAGACACGGTAGAGGC
R2
TCACGTCTACATGACTGTGGGTCTGGTGACTGCCGCCGAGCGTCAGGCTATGAGCAGCTCAGT CAGGGACATGGTGGTGGAGCAGATGCAGATGGCTCCGGTCCACATGGTCAACCCCAAGAACG CCACCGTCTTTCACGCAGACCTGCGCTTTTCCCACGCCGTCAAAGCGCTCATGTTTATGGTGCA AAACGTCACTCACAAGTCTGTGGGTTCCAACTACACTTGCGTCACTCCTGTTGTTGGAGCGG GTAACACCGTCCTGGAGCCCGCCCTGGCCGTCGATCCGGTCAAGAGCGCCAGTCTGGTGTACGAA
R1
AACACTACCAGGCTTCCAGACATGAGCGTAGAGTACTATTCCCTGGTGCAGCCCTGGTACTAC GCACCCGCCATTCCCATCAGCACTGGCCACCACCTCTACTCTTACGCCCTGAGCCTCAACGATCCTCA
q102F qTP
CCCTTCAGGGTCTACCAATTTCGGTCGCCTGACCAACGCAAGCATCAACGTGTCTCTGTCTGCCGA q102F
GGCCGGAACTGCCGCCGGAGGAGGAGGGGCAGA注 :划线处为引物位置 .
附录 C
(资料性)
大口黑鲈蛙病毒病
C.1 病原
病原为大口黑鲈蛙病毒(largemouth bass ranavirus,LMBV) ,属于虹彩病毒科(Iridoviridae)蛙病毒属 (Ranavirus)桑提库珀蛙病毒(SanteeGCooperranavirus)群成员 , 为有囊膜、直径为 130 nm~ 180 nm、基因组大小为 99 kb~ 100 kb的单分子线性双链 DNA病毒 .
C.2 易感宿主
大口黑鲈(Micropterussalmoides)、鳜 (Sinipercachuatsi)、乌鳢(Channaargus)、花鲈(Lateolabrax maculatus)、太阳鱼(Lepomisgibbosus)等 .
C.3 主要临床症状
仔鱼期腹鳍基部出血 ,尾柄出血或烂尾(图 C.1) . 稚鱼期体表大量斑点状溃疡灶 , 头部、鳃颊红肿出血、溃烂(见图 C.2) . 幼鱼期和成鱼期常见症状 :病鱼体色变黑 ,体表常出现出血点、斑块状出血性溃疡、肌肉溃疡(见图 C.3) ,鳍基或尾柄红肿、充血或出血 ,肝脏发白、偶有出血点 , 肾脏肿大或出现围心腔出血 .
标引序号说明 :
1 — 腹鳍基部出血 ;
2 — 尾柄出血、烂尾 .
图 C.1 仔鱼期主要症状
标引序号说明 :
1 — 斑点状溃疡灶 ;
2 — 胸鳍基部出血 .
图 C.2 稚鱼期主要症状
标引序号说明 :
1 — 肌肉溃疡。
图 C.3 成鱼期主要症状
附录 D
(资料性)大口黑鲈蛙病毒致细胞病变特征
D.1 EPC细胞病变特征
见图 D.1 .
图 D.1 EPC细胞病变特征
D.2 FHM 细胞病变特征
见图 D.2 .
图 D.2 FHM 细胞病变特征
