中华人民共和国水产行业标准
SC/T 3067—2025
水产品中土腥味物质的测定
气相色谱质谱法
Determination of earthy odor substances in aquatic products—
Gas chromatography-mass spectrometry
2025-12-09 发布
2026-05-01 实施
中华人民共和国农业农村部发布
前言
本文件按照 GB/T 1 .1—2020« 标准化工作导则第 1 部分 : 标准化文件的结构和起草规则»的规定起草 .
请注意本文件的某些内容可能涉及专利 . 本文件的发布机构不承担识别专利的责任 .
本文件由农业农村部渔业渔政管理局提出 .
本文件由全国水产标准化技术委员会水产品加工分技术委员会(SAC/TC 156/SC 3)归口 .
本文件起草单位 : 中国水产科学研究院长江水产研究所、中国水产科学研究院、湛江市食品药品检验所、中国水产科学研究院黄海水产研究所、中国水产科学研究院东海水产研究所、中国科学院水生生物研究所、中国水产科学研究院南海水产研究所、上海海洋大学 .
本文件主要起草人 :何力、喻亚丽、程波、高平、彭婕、郭全友、刘婷、甘金华、毛涛、张浪、黄冬梅、吴俊杰、林娜、孙伟红、刘昊昆、杨珍燕、潘创、魏涯、李慷、刘利平 .
水产品中土腥味物质的测定气相色谱质谱法
1 范围
本文件描述了用气相色谱质谱法测定水产品中土腥味物质土臭素(Geosmin,简称 GSM)和 2一甲基异莰醇(2一methylisoborneol,简称 2一MIB)的原理、试剂与材料、仪器设备、样品制备与保存、测定步骤、数据处理以及方法灵敏度、准确度和精密度。
本文件适用于水产品中土臭素和 2一甲基异莰醇含量的测定。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中 ,注日期的引用文件 ,仅该日期对应的版本适用于本文件 ; 不注日期的引用文件 , 其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。
3 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4 原理
在密封容器内 ,试样中的土腥味物质土臭素和 2一甲基异莰醇经加热扩散 , 固相微萃取纤维吸附、顶空富集后 ,采用气相色谱质谱法测定 , 内标法定量。
5 试剂与材料
试验用水应符合 GB/T 6682 一级水的规定。
5 .1 试剂
5 .1 .1 甲醇(CH3 OH) :色谱纯。
5 .1 .2 氯化钠(NaCl) :优级纯。
5 .2 溶液配制
饱和氯化钠溶液 :称取 35 .9 g氯化钠(5 .1 .2) ,加入 100 mL水振摇或超声溶解 ,静置。
5 .3 标准品
5 .3 .1 土臭素(C12 H22 O,CAS号 :16423??-19一1) ,纯度 ≥98%。
5 .3 .2 2一甲基异莰醇(C11 H20 O,CAS号 :2371??-42一8) ,纯度 ≥98%。
5 .3 .3 土臭素一D5 (C12 H17 D5 O,CAS号 :216166??-83一5) ,纯度 ≥98%。
5 .3 .4 2一异丁基一3一甲氧基吡嗪(C9 H14 N2 O,CAS号 :24683??-00一9) ,纯度 ≥99%。
5 .4 标准溶液配制
5 .4 .1 标准储备液 :准确称取土臭素(5 .3 .1)、2一甲基异莰醇(5 .3 .2)标准品各 10 mg(精确至 0 .01 mg) ,分别用甲醇(5 .1 .1)溶解并定容至 100 mL 容量瓶中 , 混匀 , 配制成浓度为 100 μg/mL 的标准储备液。
- 18 ℃以下避光保存 ,有效期 6 个月。
5 .4 .2 内标储备液 : 准确称取土臭素一D5 (5 .3 .3)、2一异丁基一3一甲氧基吡嗪 (5 .3 .4) 各 10 mg(精确至0 .01 mg) ,分别用甲醇(5 .1 .1)溶解并定容至 100 mL容量瓶中 ,混匀 , 配制成浓度为 100 μg/mL 的内标储备液。 - 18 ℃以下避光保存 ,有效期 6 个月。
5 .4 .3 混合标准中间液 :准确移取标准储备液(5 .4 .1)各 1 mL,用甲醇(5 .1 .1)稀释并定容至 100 mL容
量瓶中 ,混匀 ,配制成浓度均为 1 μg/mL混合标准中间液 . - 18 ℃以下避光保存 ,有效期 1 个月 .
5 .4 .4 混合内标中间液 :准确移取内标储备液(5 .4 .2)各 1 mL,用甲醇(5 .1 .1)稀释并定容至 100 mL容量瓶中 ,混匀 ,配制成浓度均为 1 μg/mL混合内标中间液 . - 18 ℃以下避光保存 ,有效期 1 个月 .
5 .4 .5 混合标准使用液 : 准确移取适量的混合标准中间液 (5 .4 .3) , 用甲醇 (5 .1 .1)稀释成浓度分别为0 .5 ng/mL、1 .0 ng/mL、2 .5 ng/mL、5 .0 ng/mL、10 ng/mL、25 ng/mL、40 ng/mL 的混合标准使用液 .现配现用 .
5 .4 .6 混合内标使用液 : 准确移取适量的混合内标中间液 (5 .4 .4) , 用甲醇 (5 .1 .1) 稀释成浓度为
1 .0 ng/mL 的混合内标使用液 . 现配现用 .
5 .5 材料
5 .5 .1 固相微萃取(SPME)纤维 :二乙烯基苯/羧基/聚二甲基硅氧烷(DVB/CAR/PDMS)SPME纤维组件 ,涂层厚度 50/30 μm , 或性能相当者 . 使用前 , 应先将其置于气相色谱进样口老化 . 老化温度宜为270 ℃ ,老化时间宜为 30 min,或参考厂商建议的老化温度与时间 .
5 .5 .2 磁性聚四氟磁力搅拌子 :10 mm(长) × 5 mm(外径) ,或性能相当者 .
5 .5 .3 20 mL顶空瓶 :配聚四氟乙烯(PTFE)/硅胶隔垫 .
5 .5 .4 分样筛 :孔径 0 .425 mm(40 目) .
5 .5 .5 固相微萃取专用衬管 .
5 .5 .6 液氮 :纯度 99 .99% .
6 仪器设备
6 .1 气相色谱串联质谱仪 :配电子轰击电离源(EI) .
6 .2 电子天平 :感量为 0 .01 g、0 .000 01 g 和 0 .001 g.
6 .3 组织匀浆机 .
6 .4 涡旋振荡器 .
6 .5 加热磁力搅拌器 :控温精度 ±1 ℃ ,且转速不低于 1 200 r/min.
6 .6 固相微萃取装置 :配 SPME手柄 .
7 样品制备与保存
7 .1 样品制备
取水产品肌肉 ,切成不大于 0 .5 cm×0 .5 cm×0 .5 cm 的小块于液氮(5 .5 .6) 中冷冻 2 min,迅速取出后用组织匀浆机快速进行均质处理 . 使用外力将肌肉过分样筛处理后 ,装入洁净容器中备用 .
7 .2 样品保存
- 18 ℃以下保存 .
8 测定步骤
8 .1 萃取
8 .1 .1 称取试样 0 .5 g(准确至 ±0 .001 g) , 置于 20 mL顶空瓶底部 ,依次加入 0 .15 g 氯化钠(5 .1 .2)、 50 μL混合内标使用液(5 .4 .6)、950 μL饱和氯化钠溶液(5 .2) ,再放入 1 颗磁力搅拌子 ,立即密封 . 将顶空瓶置于涡旋振荡器上 ,涡旋振荡 2 min.
8 .1 .2 将上述装有样品的顶空瓶置于加热磁力搅拌器上 , 于 70 ℃水浴加热 , 以 1 200 r/min搅拌混??-30 s后 ,将 SPME手柄插进顶空瓶 ,压出 SPME纤维至顶空瓶上部空间进行吸附萃取 .
8 .1 .3 萃取 30 min后 ,推回 SPME纤维 ,取出萃取针 ,擦干吸附于萃取针针头表面的水分 .
8 .2 解析
将萃取针插入气相色谱进样口 ,推出 SPME纤维 ,250 ℃解析 5 min.
8 .3 测定
8 .3 .1 气相色谱参考条件
气相色谱参考条件如下 :
a) 色谱柱 : 固定相为 5%一苯基甲基聚硅氧烷石英毛细管柱 ,30 m×0 .25 mm×0 .25 μm ,或性能相当者。
b) 载气 :高纯氦 ,纯度 ≥99 .999%。
c) 流速 :1 .0 mL/min。
d) 进样口温度 :250 ℃。
e) 进样方式 :不分流进样。
f) 程序升温 :起始温度 60 ℃ ,保持 2 min;以 1 0 ℃/ min的速率升温至 1 20 ℃ ; 以 3 ℃/min的速率升温至 150 ℃ ,保持 1 min;以 20 ℃/min升温到 260 ℃ ,保持 1 min。
8 .3 .2 质谱参考条件
质谱参考条件如下 :
a) 离子源 : 电子轰击电离源(EI) ;
b) 电离能量 :70 eV;
c) 离子源温度 :230 ℃ ;
d) 传输线温度 :280 ℃ ;
e) 溶剂延迟 :5 min;
f) 测定方式 :多反应监测模式( MRM) ,定性离子对、定量离子对、碰撞能量和保留时间参考值见表 1。
表 1 定性离子对、定量离子对、碰撞能量和保留时间参考值
8 .3 .3 标准工作曲线的绘制
在顶空瓶中依次加入 0 .15 g 氯化钠(5 .1 .2)、930 μL饱和氯化钠溶液(5 .2)和一颗磁力搅拌子 ,再分
别准确移取 20 μL混合标准使用液(5 .4 .5)和 50 μL混合内标使用液(5 .4 .6) ,立即密封顶空瓶。 系列标
准工作液中目标物含量分别为 10 pg、20 pg、50 pg、100 pg、200 pg、500 pg、800 pg, 内标物含量均为 50 pg。
按 8 .1 .2 和 8 .1 .3 进行萃取 ,按 8 .2 和 8 .3 进行解析测定。 以目标物峰面积与内标物峰面积比值为纵坐
标 ,对应目标物含量为横坐标 ,绘制标准工作曲线。
8 .3 .4 定性测定
按上述条件测定试样和标准工作溶液。 在相同测试条件下 ,试样中目标化合物的质量色谱峰保留时间与标准工作溶液中的保留时间相比偏差在 ±2 .5%的可允许范围之内 ;试样中目标化合物定性离子对的相对丰度比与浓度相当的标准溶液相比 ,相对丰度偏差不超过 30% ,则可判断样品中存在相应的目标化合物。 土臭素、2一甲基异莰醇的多反应监测(MRM)色谱图见附录 A 中图 A.1。
8 .3 .5 定量测定
土臭素以土臭素一D5 为内标 ,2一甲基异莰醇以 2一异丁基一3一甲氧基吡嗪为内标 ,标准曲线内标法进行定
8 .4 试剂空白
除不加试样外 ,采用完全相同的测定步骤进行检测。
9 数据处理
试样中土腥味物质的含量按公式(1)进行计算 ,单位为微克每千克(μg/kg)。
式中 :
X — 试样中目标化合物含量的数值 ,单位为微克每千克(μg/kg) ;
ρ — 试样中目标化合物质量的数值 ,单位为皮克(pg) ;
m — 试样质量的数值 ,单位为克(g) ;
计算结果以重复性条件下获得的 2 次独立测定结果的算术平均值表示 ,结果保留 3 位有效数字。
10 方法灵敏度、准确度和精密度
10 .1 灵敏度
本方法中土臭素含量的检出限为 0 .02 μg/kg,定量限为 0 .08 μg/kg;2一甲基异莰醇含量的检出限为
0 .025 μg/kg,定量限为 0 .1 μg/kg。
10 .2 准确度
本方法中土臭素在添加质量为 40 pg~ 500 pg时 , 回收率为 70% ~ 120% ;2一甲基异莰醇在添加质量为 50 pg~ 500 pg时 , 回收率为 70% ~ 120%。
10 .3 精密度
在重复性条件下 ,获得的 2 次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 15%。
附录 A
(资料性)
土臭素、2G 甲基异莰醇标准溶液和土臭素GD5、
2G 异丁基G3G 甲氧基吡嗪内标溶液多反应监测(MRM)色谱图
土臭素(200 pg)、2一甲基异莰醇 (200 pg)标准溶液和土臭素一D5 (50 pg)、2一异丁基一3一甲氧基吡嗪(50 pg)内标溶液多反应监测(MRM)色谱图见图 A.1。
15 . 22
15 . 32
12 . 0 12 . 5 13 . 0 13 . 5 14 . 0 14 . 5 15 . 0 15 . 5
注 : 出峰顺序从左到右依次为 50pg2一异丁基一3一甲氧基吡嗪、200pg2一甲基异莰醇、50 pg 土臭素一D5、200 pg 土臭素。
图 A.1 土臭素(200 pg)、2G 甲基异莰醇(200 pg)标准溶液和土臭素GD5 (50 pg)、 2G 异丁基G3G 甲氧基吡嗪(50 pg)内标溶液多反应监测(MRM)色谱图
