中华人民共和国水产行业标准
SC/T 3065—2025
海藻中多种单糖的测定离子色谱法
Determination of monosaccharides in seaweed—Ion chromatography
2025-12-09 发布
2026-05-01 实施
中华人民共和国农业农村部发布
前言
本文件按照 GB/T 1 .1—2020« 标准化工作导则第 1 部分 : 标准化文件的结构和起草规则»的规定起草 .
请注意本文件的某些内容可能涉及专利 . 本文件的发布机构不承担识别专利的责任 .
本文件由农业农村部渔业渔政管理局提出 .
本文件由全国水产标准化技术委员会水产品加工分技术委员会(SAC/TC 156/SC 3)归口 .
本文件起草单位 : 中国水产科学研究院黄海水产研究所、广东海洋大学、山东洁晶集团股份有限公司、青岛盛瀚色谱技术有限公司、赛默飞世尔科技(中国)有限公司、北京雷力海洋生物新产业股份有限公司、上海中维检测技术有限公司 .
本文件主要起草人 :孙晓杰、王联珠、孙伟红、钟赛意、徐利、郭莹莹、朱文嘉、韩春霞、牛军舰、张锦梅、梁仁雷、汤洁、李兆新、姚琳、邢丽红、彭吉星、李娜、王心鹏、严国富、刘丹丹、王静、周利杰、王小娟、金安琪 .
海藻中多种单糖的测定离子色谱法
1 范围
本文件描述了用离子色谱法测定海藻中多种单糖的原理、试剂和材料、仪器设备、试样的制备与保存、测定步骤、数据处理以及灵敏度、准确度和精密度。
本文件适用于鲜海藻及干海藻中岩藻糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖、果糖和核糖等多种单糖含量的测定。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中 ,注日期的引用文件 ,仅该日期对应的版本适用于本文件 ; 不注日期的引用文件 , 其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4 原理
试样中的海藻多糖在酸性条件下水解为海藻单糖 , 经极性有机溶剂净化 , 离子色谱电化学检测器测定 ,外标法定量。
5 试剂和材料
除另有说明外 ,所用试剂均为分析纯 ,试验用水应符合 GB/T 6682 一级水的规定。
5 .1 试剂
5 .1 .1 乙腈(CH3 CN) :色谱纯。
5 .1 .2 甲醇(CH3 OH) :色谱纯。
5 .1 .3 三氟乙酸(CF3 COOH)。
5 .1 .4 氢氧化钠(NaOH) :色谱纯。
5 .1 .5 50%氢氧化钠溶液(质量分数) :离子色谱专用 ;或参照 5 .3 .2 配制。
5 .2 标准品
5 .2 .1 岩藻糖(C6 H12 O5 ,CAS号 :2438__80__4) :纯度 ≥98%。
5 .2 .2 鼠李糖(C6 H14 O6 ,CAS号 :10030__85__0) :纯度 ≥98%。
5 .2 .3 半乳糖( C6 H12 O6 ,CAS号 :59__23__4) :纯度 ≥98%。
5 .2 .4 葡萄糖( C6 H12 O6 ,CAS号 :921__60__8) :纯度 ≥98%。
5 .2 .5 木糖( C5 H10 O5 ,CAS号 :58__86__6) :纯度 ≥98%。
5 .2 .6 甘露糖( C6 H12 O6 ,CAS号 :10030__80__5) :纯度 ≥98%。
5 .2 .7 果糖( C6 H12 O6 ,CAS号 :57__48__7) :纯度 ≥98%。
5 .2 .8 核糖( C5 H10 O5 ,CAS号 :50__69__1) :纯度 ≥98%。
5 .3 溶液配制
5 .3 .1 2 mol/L三氟乙酸溶液 : 准确移取 15 mL 三氟乙酸 (5 .1 .3) , 用水稀释并定容至 100 mL, 现用现配 .
5 .3 .2 50%氢氧化钠溶液(质量分数) :称取 50 .0 g氢氧化钠(5 .1 .4) ,加入 50 .0 g水中 ,加热溶解后冷却至室温 ,密封保存 .
5 .3 .3 200 mmol/L 氢氧化钠溶液 :量取 10 .4 mL氢氧化钠溶液(5 .1 .5 或 5 .3 .2) ,用水稀释并定容至1 000 mL,现用现配 .
5 .3 .4 50 mmol/L 氢氧化钠溶液 : 量取 2 .6 mL 氢氧化钠溶液 (5 .1 .5 或 5 .3 .2) , 用水稀释并定容至1 000 mL,现用现配 .
5 .4 标准溶液配制
5 .4 .1 标准储备液(1 .0 mg/mL) :分别准确称取岩藻糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄糖、甘露糖、木糖、果糖和核糖各 10 mg(精确至 0 .01 mg) ,用水溶解并定容于 10 mL容量瓶中 ,配制成浓度为 1 .0 mg/mL 的储备液 . - 18 ℃下聚乙烯(PE)管保存 ,有效期为 1 个月 .
5 .4 .2 混合标准中间液 :分别吸取岩藻糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖、核糖和果糖标准储备液(5 .4 .1)适量 ,用水稀释配制成岩藻糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、甘露糖、核糖浓度为 10 μg/mL,果糖浓度为 20 μg/mL 的混合标准中间液 ,现用现配 .
5 .5 材料
5 .5 .1 具塞消化管 :20 mL螺旋盖玻璃试管 ,配置聚对苯二甲酸丁二醇酯(PBTP)耐压盖 .
5 .5 .2 具塞离心管 :15 mL,聚丙烯材质 .
5 .5 .3 比色管 :10 mL.
5 .5 .4 容量瓶 :10 mL、100 mL、1 000 mL.
5 .5 .5 水相微孔滤膜 :0 .22 μm.
5 .5 .6 高纯氮气 :纯度 ≥99 .999% .
6 仪器设备
6 .1 离子色谱仪 :配电化学检测器 , 四元泵 .
6 .2 分析天平 :感量 0 .000 01 g.
6 .3 天平 :感量 0 .001 g.
6 .4 氮吹仪 .
6 .5 离心机 :转速不低于 4 000 r/min.
6 .6 电热恒温干燥箱 .
6 .7 涡旋振荡器 .
6 .8 高速组织匀浆机 .
6 .9 粉碎机 .
7 试样的制备与保存
7 .1 鲜样
鲜海藻试样 ,去除砂石等杂质后均质 ,于 - 18 ℃以下保存备用 .
7 .2 干样
干海藻试样 ,用粉碎机打碎 ,过 425 μm(40 目)网筛 ,混匀后装入洁净容器中 ,室温密封保存备用 .
8 测定步骤
8 .1 水解
称取 1 g(精确至 0 .01 g)海藻鲜样或 0 .1 g(精确至 0 .001 g)海藻干样于 20 mL具塞消化管(5 .5 .1)中 ,加入 5 mL 2 mol/L三氟乙酸溶液(5 .3 .1) ,涡旋 ,充氮封管 ,置于电热恒温干燥箱中 , 110 ℃水解 3 h。取出消化管冷却至室温 ,将水解液全部转移至 15 mL具塞离心管(5 .5 .2) ,用 2 mL水冲洗消化管 ,转移冲洗液至上述 15 mL离心管中 ,再加 2 mL水重复操作一次 ,合并冲洗液 ,4 000 r/min离心 5 min,将上清液转移至容量瓶后加水定容至 10 mL,摇匀 ,待净化。
8 .2 净化
准确移取 1 mL上述待净化液至 10 mL 比色管(5 .5 .3) 中 ,加入 1 mL 甲醇(5 .1 .2) , 60 ℃ 氮气吹至近干 ,再加 1 mL 甲醇溶解残渣 ,重复氮吹至近干操作 3 次。准确加入 4 mL水溶解残渣 ,再加入 6 mL 乙腈 (5 .1 .1)涡旋混匀后 , 加乙腈定容至 10 mL, 4 000 r/min离心 5 min, 上清液经 0 .22 μm 微孔滤膜(5 .5 .5)过滤后 ,供离子色谱分析。
8 .3 标准工作曲线的绘制
准确移取混合标准中间液(5 .4 .2)适量 ,用水配制成岩藻糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖、核
糖质量浓度分别为 0 .1 μg/mL、0 .2 μg/mL、0 .5 μg/mL、1 .0 μg/mL、2 .0 μg/mL、5 .0 μg/mL,果糖浓度
分别为 0 .2 μg/mL、0 .4 μg/mL、1 .0 μg/mL、2 .0 μg/mL、4 .0 μg/mL、10 μg/mL 的系列单糖混合标准工
作液 , 以各单糖的峰面积为纵坐标 ,相应单糖浓度为横坐标 ,绘制标准工作曲线。 多种单糖混合标准溶液
8 .4 测定
8 .4 .1 色谱参考条件
离子色谱参考条件如下 :
a) 色谱柱 : 阴离子交换柱(150 mm×3 mm ,粒径 6 .0 μm , 以季铵盐为功能基 , 乙基乙烯基苯/二乙烯基苯树脂作为填料) ,带 30 mm×3 mm 保护柱 ,或性能相当者。
b) 电化学检测器 :Au工作电极;Ag/AgCl参比电极 ;糖检测波形参考条件见表 1。
表 1 糖检测波形
c) 流速 :0 .45 mL/min;
d) 柱温 :30 ℃ ;
e) 进样量 :25 μL;
f) 淋洗液 :A:水 ;B:50 mmol/L NaOH 溶液(5 .3 .4 , 高纯氮气保护) ; C: 200 mmol/L NaOH 溶液
(5 .3 .3 ,高纯氮气保护) ;梯度洗脱参考条件见表 2。
表 2 梯度洗脱条件
8 .4 .2 测定方法
8 .4 .2 .1 定性方法
按 8 .4 .1 的色谱条件进行测定 ,根据各单糖色谱峰的保留时间定性。 在相同测试条件下 ,试样溶液中
各单糖色谱峰的保留时间与相应单糖标准溶液色谱峰的保留时间偏差应在 ± 2 .5 %以内。
8 .4 .2 .2 定量方法
将试样溶液注入离子色谱仪中 ,按 8 .4 .1 的色谱条件进行测定 ,得到对应的峰面积 ,根据标准工作曲
线外标法得到试样中单糖的质量浓度。 试液中被测物的响应值均应在标准工作曲线线性范围内 ,超出线
图 A.3。
8 .5 空白试验
除不称取试样外 ,采取完全相同的测定步骤进行检测。
9 数据处理
试样中各单糖的含量按公式(1)计算。
X = m × 10…………………………………………… (1)
式中 :
X — 试样中各单糖含量的数值 ,单位为毫克每百克(mg/100 g) ;
c — 试液中各单糖质量浓度的数值 ,单位为微克每毫升(μg/mL) ;
V — 待测试液体积的数值 ,单位为毫升(mL) ;
f — 稀释倍数 ;
m — 试样质量的数值 ,单位为克(g)。
测定结果用 2 次平行测定的算术平均值表示 ,保留 3 位有效数字。
10 灵敏度、准确度和精密度
10 .1 灵敏度
10 .1 .1 鲜海藻
本方法的鲜海藻中岩藻糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖和核糖的检出限均为 2.00 mg/100 g,定量限均为 6 .00 mg/100 g;果糖的检出限为 4 .00 mg/100 g,定量限为 12 .0 mg/100 g。
10 .1 .2 干海藻
本方法的干海藻中岩藻糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖和核糖的检出限均为 20 .0 mg/100 g,定量限均为 60 .0 mg/100 g;果糖的检出限为 40 .0 mg/100 g,定量限为 120 mg/100 g。
10 .2 准确度
10 .2 .1 鲜海藻
本方法的鲜海藻中岩藻糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖和核糖添加浓度为 6 .00 mg/100 g~
50 .0 mg/100 g 时 ,果糖添加浓度为 12 .0 mg/100 g~ 100 mg/100 g 时 , 回收率均为 85 .0% ~ 105%。
10 .2 .2 干海藻
本方法的干海藻中岩藻糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖和核糖添加浓度为 60.0 mg/100 g~ 500 mg/100 g 时 ,果糖添加浓度为 120 mg/100 g~ 1 000 mg/100 g 时 , 回收率均为 85 .0% ~ 105%。
10 .3 精密度
在重复性条件下 ,获得的 2 次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的 10%。
附录 A
(资料性)
多种单糖离子色谱图
A.1 多种单糖混合标准溶液
多种单糖混合标准溶液的离子色谱图见图 A.1
标引序号说明 :
2 — 鼠李糖(c = 0 .5 μg/mL) ; 6 — 甘露糖(c = 0 .5 μg/mL) ;
图 A.1 多种单糖混合标准溶液的离子色谱图
A.2 鲜海带试样
鲜海带试样的离子色谱图见图 A.2
标引序号说明 :
1 — 岩藻糖 ;
2 — 鼠李糖 ;
3 — 半乳糖 ;
4 — 葡萄糖 ;
A.2
5 — 木糖 ;
6 — 甘露糖 ;
7 — 核糖。
鲜海带试样的离子色谱图
A.3 干浒苔试样
干浒苔试样的离子色谱图见图 A.3
标引序号说明 :
1 — 鼠李糖 ;
2 — 半乳糖 ;
3 — 葡萄糖 ;
4 — 木糖 ;
A.3
5 — 甘露糖 ;
6 — 果糖 ;
7 — 核糖。
干浒苔试样的离子色谱图
