中华人民共和国农业行业标准
NY/T 4887—2025
植物源性食品中γ-氨基丁酸含量的测定
高效液相色谱法
Determination of γ-aminobutyric acid in foods of plant origin by
high performance—Liquid chromatography method
2025-12-09 发布
2026-05-01 实施
中华人民共和国农业农村部发布
NY/T 4887—2025
前言
本文件按照 GB/T 1 .1—2020« 标准化工作导则第 1 部分 : 标准化文件的结构和起草规则»的规定起草 .
请注意本文件的某些内容可能涉及专利 . 本文的发布机构不承担识别专利的责任 .
本文件由农产品质量安全监管司提出 .
本文件由农业农村部农产品营养标准专家委员会归口 .
本文件起草单位 :北京市营养源研究所有限公司、农业农村部食物与营养发展研究所、内蒙古蒙牛乳业 (集团)股份有限公司、内蒙古伊利实业集团股份有限公司、中国农业科学院农产品加工研究所、北京工商大学、黑龙江飞鹤乳业有限公司、北京臻味坊食品有限公司、北京京瓦农业科技创新中心、北京市农林科学院农产品加工与食品营养研究所 .
本文件主要起草人 :崔亚娟、朱大洲、潘玲、顾海华、张淏惟、孔凡华、白沙沙、许洪高、宋晓东、马文丽、李翠枝、陈素敏、刘璇、许朵霞、刘野、王象欣、耿德胜、彭珍、郭斗斗、刘光敏 .
植物源性食品中 γ一氨基丁酸含量的测定高效液相色谱法
1 范围
本文件规定了植物源性食品中 γ一氨基丁酸含量的高效液相色谱测定方法。
本文件适用于植物源性食品中 γ一氨基丁酸含量的测定。 补充线性范围信息。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中 ,注日期的引用文件 ,仅该日期对应的版本适用于本文件 ; 不注日期的引用文件 , 其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。
3 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4 原理
试样经乙醇水溶液提取 , 经 4一二甲基胺基偶氮苯一4一磺酰氯(DABS一Cl)衍生 , 用高效液相色谱法测定 , 以保留时间定性 ,外标法定量。
5 试剂和材料
除非另有说明 ,本方法所用试剂均为分析纯 ,水为 GB/T 6682 规定的一级水。
5 .1 试剂
5 .1 .1 无水乙醇(C2 H5 OH) :优级纯。
5 .1 .2 甲醇(CH3 OH) :优级纯。
5 .1 .3 甲醇(CH3 OH) :色谱纯。
5 .1 .4 乙腈(CH3 CN) :色谱纯。
5 .1 .5 碳酸氢钠(NaHCO3)。
5 .1 .6 三水合乙酸钠(CH3 COONa . 3H2 O)。
5 .1 .7 4一二甲基胺基偶氮苯一4一磺酰氯(C14 H14 CIN3 O2 S) :简称 DABS一Cl。
5 .2 试剂配制
5 .2 .1 乙醇水溶液 :无水乙醇+水= 6+4(V+V) ,取无水乙醇(5 .1 .1)600 mL和水 400 mL,混匀。
5 .2 .2 碳酸氢钠溶液(0 .04 g/mL) :称取碳酸氢钠(5 .1 .5)0 .40 g,用水溶解后 ,转移到 10 mL容量瓶中 ,用水定容 ,混匀 ,现配现用。
5 .2 .3 4一二甲基胺基偶氮苯一4一磺酰氯溶液 (2 .0 mg/mL) : 称取 DABS一Cl (5 .1 .7) 20 .0 mg, 用乙腈(5 .1 .4)溶解后 ,转移至 10 mL棕色容量瓶中 ,用乙腈(5 .1 .4)定容 ,混匀 ,现配现用。
5 .2 .4 乙酸钠溶液(6 .8 mg/mL) :称取三水合乙酸钠(5 .1 .6)3 .40 g,用水溶解并稀释至 500 mL,经微孔滤膜过滤。
5 .3 标准品
5 .3 .1 γ一氨基丁酸(γ一aminobutyric acid,GABA, C4 H9 NO2 , CAS号 : 56??-12一2) : 纯度 ≥99 .9% , 或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
5 .4 标准溶液配制
5 .4 .1 标准储备液 (1 000 μg/mL) : 称取 γG氨基丁酸 (5 .3 .1) 10 .0 mg(精确至 0 .1 mg) , 用无水乙醇
棕色玻璃瓶中 ,于 - 18 ℃中冷冻保存 ,有效期 3 个月 .
5 .4 .2 标准工作液 : 分别移取标准储备液 (5 .4 .1) 0 .25 mL、0 .50 mL、1 .00 mL、1 .50 mL、2 .00 mL、 3.00 mL于50 mL棕色容量瓶中 ,用乙醇水溶液(5.2.1)定容至刻度 ,得到浓度为 5.00 μg/mL、10.00 μg/mL、 20.00 μg/mL、30.00 μg/mL、40.00 μg/mL、60.00 μg/mL的系列标准工作液 ,现用现配 .
5 .5 材料
5 .5 .1 有机系微孔滤膜 :孔径为 0 .45 μm.
5 .5 .2 网筛 :孔径为 0 .425 mm.
6 仪器与设备
6 .1 天平 :感量 0 .000 1 g 和 0 .000 01 g.
6 .2 高效液相色谱仪 :配有二极管阵列检测器或性能相当的检测器 .
6 .3 离心机 :转速 ≥5 000 r/min.
6 .4 涡旋混合器 .
6 .5 数控超声波清洗器 .
6 .6 振荡水浴锅 .
6 .7 匀浆机 .
6 .8 高速粉碎机 .
7 分析步骤
7 .1 试样制备
样品取可食部分进行制备 . 均匀的液体样品混匀后直接取样 ;带悬浮物的液体样品、新鲜果蔬、半固
体等样品采用匀浆机匀浆混匀 ,置于- 18 ℃冷冻保存 ,备用 ; 固体样品采用高速粉碎机粉碎 ,过 0 .425 mm
7 .2 试样处理
7 .2 .1 提取
称取干样 1 .0 g~ 2 .0 g,鲜样 2 .0 g~ 5 .0 g(精确至 0 .001 g)于 50 mL 离心管中 , 加入乙醇水溶液(5 .2 .1)10 mL,超声提取 30 min,涡旋混匀器上振荡 2 min,静置 5 min,5 000 r/min离心 5 min,上清液转入 25 mL容量瓶中 ,残渣再用 10 mL提取溶液提取一次 ,合并 2 次提取液 ,用乙醇水溶液(5 .2 .1)定容至 25 mL,摇匀 ,待衍生化 .
7 .2 .2 衍生化
准确吸取 1 mL 试样溶液或标准工作溶液于具塞试管中 , 加入 0 .2 mL 碳酸氢钠溶液 (5 .2 .2) 和
0 .4 mL 4G二甲基胺基偶氮苯G4G磺酰氯溶液(5 .2 .3) ,混匀后在 70 ℃水浴中衍生反应 20 min,用微孔滤膜
7 .3 测定
7 .3 .1 仪器参考条件
7 .3 .1 .1 色谱柱 :C18 柱 ,150 mm×4 .6 mm ,5 μm ,或具同等性能的色谱柱 ;
7 .3 .1 .2 柱温 :30 ℃ ;
7 .3 .1 .3 流动相 : 乙腈(5 .1 .4)+乙酸钠溶液(5 .2 .4) (35+65) ;
7 .3 .1 .4 流速 :1 .0 mL/min;
7 .3 .1 .5 检测波长 :436 nm;
7 .3 .1 .6 进样量 :10 μL。
7 .3 .2 标准曲线的制作
将系列标准工作液分别注入液相色谱仪中 ,测定相应的峰面积 , 以标准工作液的浓度为横坐标 , 以峰面积为纵坐标 ,绘制标准曲线。
7 .3 .3 样品的测定
试样溶液经高效液相色谱仪分析 ,测得峰面积 ,根据标准溶液色谱峰的保留时间和峰面积 ,对试样溶液的色谱峰进行定性 ,外标法定量。 γ一氨基丁酸标准溶液液相色谱图见附录 A。
8 分析结果的表述
试样中 γ一氨基丁酸含量按公式(1)计算。
式中 :
ω — 试样中 γ一氨基丁酸含量的数值 ,单位为毫克每千克(mg/kg) ;
ρ — 根据标准曲线计算得到的 γ一氨基丁酸质量浓度的数值 ,单位为微克每毫升(μg/mL) ;
V — 试样溶液定容体积的数值 ,单位为毫升(mL) ;
m — 测试样品称样质量的数值 ,单位为克(g) ;
以 2 次测定结果的算术平均值表示 ,计算结果保留 3 位有效数字。
9 精密度
9 .1 重复性
在重复性条件下获得的 2 次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10%。
9 .2 再现性
在再现性条件下获得的 2 次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10%。
10 检出限和定量限
当样品取样量为 5 .0 g, 定容体积为 50 mL 时 , γ一氨基丁酸的检出限为 0 .03 mg/kg, 定量出限为0 .10 mg/kg。
附录 A
(资料性)
γ一氨基丁酸标准溶液高效液相色谱图
γ一氨基丁酸标准溶液高效液相色谱图(5 .0 μg/mL)见图 A.1。
mAU WVL: 438 nm
400
l -3 . 807
200
min
1 . 3 2. 5 3 . 8 5 . 0 6 . 3 7 . 5
图 A.1 γ一氨基丁酸标准溶液高效液相色谱图(5 .0 μg/mL)
