中华人民共和国农业行业标准
NY/T 4870—2025
土壤中磺胺类、喹诺酮类、四环素类、
大环内酯类和氯霉素类抗生素残留量
的测定液相色谱-质谱联用法
Determination of sulfonamides, quinolones, tetracyclines, macrolides
and chloramphenicols antibiotics in soil—Liquid chromatography-tandem
mass spectrometry method
2025-12-09 发布
2026-05-01 实施
中华人民共和国农业农村部发布
NY/T 4870—2025
前言
本文件按照 GB/T 1 .1—2020« 标准化工作导则第 1 部分 : 标准化文件的结构和起草规则»的规定起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。 本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由农业农村部科学技术司提出。
本文件由农业农村部农业资源环境标准化技术委员会归口。
本文件起草单位 :农业农村部环境保护科研监测所、中国农业科学院农业环境与可持续发展研究所。
本文件主要起草人 :孙宝利、贺泽英、陈永杏、陕红、邓凯、史小萌、张珊、黄金丽、封朝晖、何沛侨、赤杰、仝乘风。
土壤中磺胺类、喹诺酮类、四环素类、大环内酯类和
氯霉素类抗生素残留量的测定液相色谱质谱联用法
1 范围
本文件规定了土壤中磺胺类、喹诺酮类、四环素类、大环内酯类和氯霉素类共 54 种抗生素(见附录 A)
残留量的液相色谱__质谱联用测定方法。
本文件适用于土壤中 54 种抗生素残留量的测定。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中 ,注日期的引用文件 ,仅
该日期对应的版本适用于本文件 ;不注日期的引用文件 ,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
NY/T 52 土壤水分测定法
NY/T 395 农田土壤环境质量监测技术规范
3 原理
试样中的抗生素用乙腈和磷酸盐缓冲液混合溶液提取 ,提取液经分离、分散固相萃取净化和旋转蒸发浓缩 ,液相色谱__质谱联用仪检测 ,外标法定量。
4 试剂和材料
除非另有说明 ,在分析中仅使用分析纯的试剂 ,水为 GB/T 6682 规定的一级水。
4 .1 试剂
4 .1 .1 乙腈(CH3 CN ,CAS号 :75__05__8)。
4 .1 .2 甲醇(CH4 O,CAS号 :67__56__1) :色谱纯。
4 .1 .3 甲酸(CH2 O2 ,CAS号 :64__18__6)。
4 .1 .4 磷酸(H3 PO4 ,CAS号 :7664__38__2)。
4 .1 .5 磷酸二氢钾(KH2 PO4 ,CAS号 :7778__77__0)。
4 .1 .6 乙二胺四乙酸二钠二水合物(C10 H14 N2 Na2 O8 ●2H2 O,CAS号 :6381__92__6)。
4 .1 .7 无水硫酸镁(MgSO4 ,CAS号 :7487__88__9)。
4 .1 .8 氯化钠(NaCl,CAS号 :7647__14__5)。
4 .1 .9 氨__甲醇溶液(NH3 ,CAS号 :7664__41__7) :7 mol/L。
4 .2 溶液配制
4 .2 .1 磷酸盐缓冲溶液 :称取 27 .2 g磷酸二氢钾用水溶解 ,加入 1 .35 mL磷酸混匀 ,用水稀释至 1 L。
4 .2 .2 乙腈__甲酸溶液(95+5) :量取 50 mL 甲酸加入 950 mL乙腈中 ,混匀。
4 .2 .3 甲酸__水溶液(1+99) :量取 1 mL 甲酸加入 99 mL水中 ,混匀。
4 .2 .4 甲醇__甲酸水溶液(50+50) :量取 50 mL 甲醇加入 50 mL 甲酸__水溶液(4 .2 .3) ,混匀。
4 .3 标准品
54 种抗生素标准品 ,见附录 A,纯度 ≥95%。
4 .4 标准溶液配制
4 .4 .1 标准储备溶液 :磺胺喹噁啉、诺氟沙星、氟罗沙星、西诺沙星、吡哌酸、环丙沙星、洛美沙星、奥比沙
星、喹酸和泰乐菌素分别准确称取标准品约 10 mg(精确至 0 .1 mg)于烧杯中 , 用甲醇溶解后转移至100 mL容量瓶中 ,用甲醇定容至刻度 ,混匀 ,配制成质量浓度为 100 mg/L的标准储备溶液 ;其他抗生素 ,分别准确称取标准品约 10 mg(精确至 0 .1 mg)于烧杯中 ,用甲醇溶解后转移至 10 mL容量瓶中 ,用甲醇
度 ,混匀 ,配制成质量浓度为 1 000 mg/L的标准储备溶液 . 避光- 20 ℃及以下条件保存 ,有效
4 .4 .2 混合标准储备溶液(20 mg/L) : 吸取一定量的农药标准储备溶液于容量瓶中 ,用甲醇定容至刻度 ,避光- 20 ℃及以下条件保存 ,有效期 3 个月 .
4 .4 .3 混合标准溶液(5 mg/L) : 吸取一定量混合标准储备溶液于容量瓶中 , 用甲醇定容至刻度 , 避光- 20 ℃及以下条件保存 ,有效期 1 个月 .
4 .5 材料
4 .5 .1 陶瓷均质子 :2 cm(长) × 1 cm(外径) ,或相当者 .
4 .5 .2 十八烷基硅烷键合硅胶(C18) :粒径 40 μm~ 60 μm.
4 .5 .3 乙二胺G NG丙基硅烷化硅胶(PSA) :40 μm~ 60 μm.
4 .5 .4 微孔滤膜(有机相) :13 mm×0 .22 μm ,或相当者 .
5 仪器设备
5 .1 液相色谱G三重四极杆质谱联用仪 :配有电喷雾离子源(ESI) .
5 .2 旋转蒸发仪 :可控温 .
5 .3 分析天平 :感量 0 .1 mg和 0 .01 g.
5 .4 涡旋混合仪 .
5 .5 离心机 :转速不低于 4 000 r/min.
6 试样制备
按照 NY/T 395 的要求采集新鲜土壤样品 ,去除石子、植物根茎等杂质后混合均匀 ,不风干 ,放入聚乙
烯瓶或袋中 . 将样品按照测试和备用分别存放 ,于 - 20 ℃及以下条件保存 . 按照 NY/T 52 测定样品含
7 测定步骤
7 .1 前处理
称取 2 g试样(精确至 0 .01 g) 于 50 mL 塑料离心管中 , 加入 0 .4 g 乙二胺四乙酸二钠二水合物
振(4. .取)、13 陶in瓷,4 m,然in 1i,(..0酸,入(4 .1.,
盐缓冲溶液(4 .2 .1)和 10 mL乙腈G 甲酸溶液(4 .2 .2)重复提取 1 次 ,合并上清液 . 向合并的提取液中加入
200 mg C18、200 mg PSA 的 15 mL塑料离心管中 ,涡旋混匀 1 min. 4 000 r/min离心 5 min,准确吸取 5
于 L甲,.(G)溶,( ,,后在 40 ℃水浴条件下旋转
7 .2 测定
7 .2 .1 仪器参考条件
7 .2 .1 .1 液相色谱参考条件
a) 色谱柱 :C18 [2 .1 mm(内径) × 100 mm ,1 .8 μm] ,或相当者 ;
b) 流动相 :A相为 0 .1%甲酸水溶液 ,B相为甲醇 . 流动相梯度条件见表 1 ;
表 1 流动相及其梯度条件(VA+VB)
c) 流速 :0 .3 mL/min;
d) 柱温 :40 ℃ ;
e) 进样量 :2 μL。
7 .2 .1 .2 质谱参考条件
a) 离子源类型 : 电喷雾离子源(ESI) ;
b) 扫描方式 :正离子和负离子同时扫描 ;
)) ::;5 500 V,负离子- 4 500 V;
e) 雾化气 :0 .345 MPa;
f) 辅助加热气 :0 .345 MPa;
g) 多反应监测 :每种抗生素分别选择至少 2 个子离子。 所有需要检测的子离子按照出峰顺序 ,分时
7 .2 .2 基质匹配标准工作曲线
空白土壤样品按照 7 .1 进行前处理 ,得到空白基质溶液。 准确吸取一定量的混合标准溶液 ,逐级用空
白基质溶液稀释成质量浓度为 0 .001 mg/L、0 .002 mg/L、0 .005 mg/L、0 .01 mg/L、0 .02 mg/L、
0 .05 mg/L、0 .1 mg/L、0 .2 mg/L和 0 .5 mg/L的系列基质匹配标准工作溶液 ,根据仪器性能和检测需要
选择不少于 5 个质量浓度点 ,供液相色谱一质谱联用仪测定。 以抗生素定量子离子的质量色谱峰面积为纵
坐标、相对应的基质匹配标准工作溶液质量浓度为横坐标 ,绘制基质匹配标准工作曲线。
7 .2 .3 定性及定量
7 .2 .3 .1 定性测定
试样中目标抗生素色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间相比较 , 相差应在 ± 0 .1 min之内。
在相同实验条件下进行样品测定时 ,如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致 ,并且目标化合
物选择的子离子均出现 ,而且同一检测批次 ,对同一化合物 ,样品中目标化合物的离子丰度比与质量浓度相当的基质标准溶液相比 ,其允许偏差不超过表 2 规定的范围 ,则可判断样品中存在目标抗生素。
表 2 定性时离子丰度比的最大允许偏差
本方法的标准物质 LC一MS/MS多反应监测质量色谱图见附录 C。
7 .2 .3 .2 定量测定
外标法定量。
7 .3 试样溶液的测定
将基质匹配标准工作溶液和试样溶液依次注入液相色谱一质谱联用仪中 ,保留时间和离子丰度比定
性 ,测得定量子离子的质量色谱峰面积 ,待测试样溶液中抗生素的响应值应在仪器检测的定量测定线性范
围之内 ,超过线性范围时应稀释到线性范围内后再进行分析。
7 .4 平行试验
按以上步骤对同一试样进行 2 次平行试验测定。
7 .5 空白试验
除不加试料外 ,按照 7 .1 ~ 7 .4 的规定进行平行操作。
8 结果计算
试样中抗生素残留量以质量分数 ω 计 ,单位以毫克每千克(mg/kg)表示 ,按公式(1)或公式(2)计算。
式中 :
ρ1 — 基质匹配标准溶液中抗生素质量浓度的数值 ,单位为毫克每升(mg/L) ;
ρ2 — 从基质匹配标准工作曲线中得到的试样溶液中抗生素质量浓度的数值 , 单位为毫克每升
(mg/L) ;
A — 样品溶液中被测抗生素的峰面积 ;
AS— 基质匹配标准溶液中被测抗生素的峰面积 ;
V1 — 提取溶剂乙腈一甲酸溶液总体积的数值 ,单位为毫升(mL) ;
V2 — 分取的提取溶液体积的数值 ,单位为毫升(mL) ;
V3 — 样品溶液定容体积的数值 ,单位为毫升(mL) ;
m — 土壤试样质量的数值 ,单位为克(g) ;
θm — 土壤试样的质量含水量。
计算结果以重复性条件下获得的 2 次独立测定结果的算术平均值表示 ,保留 2 位有效数字。 含量超
1 mg/kg时 ,保留 3 位有效数字。
9 精密度
在重复性条件下 ,获得的 2 次独立测试结果的绝对差值不得超过重复性限(r) ,见附录 D。
在再现性条件下 ,获得的 2 次独立测试结果的绝对差值不得超过再现性限(R) ,见附录 D。
10 其他
本文件的方法定量限为 0 .002 mg/kg~0 .01 mg/kg(见附录 A)。
附录 A
(资料性)
54 种抗生素中英文名称、分子式、CAS号和方法定量限
54 种抗生素中英文名称、分子式、CAS号和方法定量限见表 A.1。
表 A.1 54 种抗生素中英文名称、分子式、CAS号和方法定量限
表 A.1 (续)
附录 B
(资料性)
54 种抗生素的保留时间、母离子、子离子及离子对质谱参数
54 种抗生素的保留时间、母离子、子离子及离子对质谱参数见表 B.1。
表 B.1 54 种抗生素的保留时间、母离子、子离子及离子对质谱参数
表 B.1 (续)
附录 C
(资料性)
54 种抗生素的多反应监测(MRM)质量色谱图
54 种抗生素的多反应监测(MRM)质量色谱图见图 C.1。
1 . 2 x 106
3 . 0 x 105 6 . 77 4. 67
8 0 x 105
2 . 5 x 105
2 · 0 x 105
6 . 0 105
1 0 x 105 4. 0 x 105
5 . 0 x 105
5 . 0 x 104 2 . 0 x 105
0 0
6 . 5 7 . 0 4. 0 4.5 5 . 0
t,min t,min
3 . sulfachloropyridazine 4 . sulfadiazine磺胺氯哒嗪磺胺嘧啶
2 . 0 x 106
3 . 0 x 106 7 . 10 · 5 . 58 1 .4 x 106
2 . 5 x 106
2 . 0 x 106 1 0 x 106
1 . 5 x 106
6 . 0 x 105
1 . 0 x 106
4 . 0 x 105
5 . 0 x 105 2 . 0 x 105
0 0
6 .5 7 . 0 6 . 0
t,min
7 . sulfadoxin 8 · sullfamerazine
磺胺邻二甲氧嘧啶磺胺甲基嘧啶
9 x 105 6 . 83
8 x I05 1 .4 or ‘.5。
7 x 105 1 . 2 x 106
7 0 x 105
6 x 105 1 0 x 106
6 0 x 105
5 05 过 8 . 0 x 15
4 x 105
6 . 0 105
3 x 105
4 . 0 x 105
2 x 105
2 . 0 x 105
●
0
6 . 0 6 .5
t,min
12. sulfamethoxypyridazine
磺胺甲氧哒嗪
7 . 39
8 . 12
20 000
8 . 0 x 15 6 . 0 x 105
2 x 105
1 0 x 105
1 105
0
6 . 5 7 . 0
t,min
13 · sullfamonomethoxine
磺胺间甲氧嘧啶
图 C.1 54 种抗生素的多反应监测(MRM)质量色谱图
3 . 0 x 106
7 . 69 4. 97 4. 69
2 . 5 x 106
2 . 0 x 106
1 . 5 x 106
6 0 x 105
1 . 0 x 106
5 . 0 x 105
0
7 . 5 8 . 0 5 . 0 5 . 5 4 . 0 4. 5 5 . 0
t,min t,min t,min
5 . 5 6 . 0 7 . 0 7 . 5
t,min t,min
21 . trimethoprim 22 . cinoxacin
甲氧氨嘧啶西诺沙星
6 . 77 1 .4 x 105 6 . 21 3 . 5 x 106 5 . 92
1 . 5 x 106
1 . 2 x 106 3 . 0 x 106
1 0 x 106 2 . 5 x 106
8 . 0 x 105 2 . 0 x 10s
6 . 0 x 105 · 5 x 10f
4 . 0 x 105 5 . 5 105 1 . 0 x 1 2 . 0 x 105 5 . 0 x 105
0
6 . 0 6 . 5 7 . 0 6 . 0 6 . 5
t,min t,min
25 . difloxacin 28 . fleroxacin二氟沙星氟罗沙星
8 . 35
6 . 32
4 x 106
6 . 0 x 105 过
●
4 . 0 x 105
2 . 0 x 105
2. 0 x 105
0
6 . 0 6 .5
t,min
32 . norfloxacin
氟沙星
3 . 5 x 106
6 . 14
3 . 0 x 10 3 . 0 x 105
2. 5 x 105 2 . 5 x 105
2. 0 x 10c 2. 0 x 105 1 .5 x 10s
· 5 x I0r · 5 05 · OX IS
1 . 0 x 106 1 . 0 x 105
5 . 0 x 105
5 . 0 x 105 5 . 0 x 104
0 0
5 .5 6 . 0 6 . 5 6 . 0 6 . 5 7 . 0 5 . 5 6 . 0 6 . 5
t,min t,min t,min
33 . ofloxacin 34 . orbifloxacin 36 . pefloxacin
氧氟沙星奥比沙星培氟沙星
图 C.1 (续)
图 C.1 (续)
附录 D
(资料性)
54 种抗生素精密度数据
重复性限(r)要求见表 D.1 ,再现性限(R)要求见表 D.2。
表 D.1 54 种抗生素的重复性限(r)
表 D.1 (续)
表 D.2 54 种抗生素的再现性限(R)
表 D.2 (续)
