中华人民共和国农业行业标准
NY/T 4863—2025
柑橘中挥发性物质测定气相色谱-质谱联用法
Determination of volatile compounds in citrus using— Gas chromatography-mass spectrometry
2025-12-09 发布
2026-05-01 实施
中华人民共和国农业农村部发布
NY/T 4863—2025
前言
本文件按照 GB/T 1 .1—2020« 标准化工作导则第 1 部分 : 标准化文件的结构和起草规则»的规定起草 .
请注意本文件的某些内容可能涉及专利 . 本文件的发布机构不承担识别专利的责任 .
本文件由农业农村部农产品质量安全监管司提出 .
本文件由农业农村部农产品加工标准化技术委员会归口 .
本文件起草单位 :华中农业大学、广东省农业科学院果树研究所 .
本文件主要起草人 :徐娟、陈嘉景、刘园、张红艳、蒋友武、曾继吾 .
柑橘中挥发性物质测定气相色谱质谱联用法
1 范围
本文件描述了柑橘中挥发性物质的气相色谱质谱联用测定方法。
本文件适用于柑橘中 α_蒎烯、香桧烯、β_月桂烯、d_柠檬烯、γ_松油烯、(-) 芳樟醇、橙花醛、乙酸芳樟
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中 ,注日期的引用文件 ,仅该日期对应的版本适用于本文件 ; 不注日期的引用文件 , 其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4 原理
根据溶剂之间的相似相溶原理 ,利用有机溶剂萃取挥发性物质。
气相色谱质谱联用法(GC_MS)测定根据物质的质谱信息(MS)和保留指数(RI)进行定性分析 ,结合外标法与内标法进行定量。
5 试剂和材料
本文件所使用试剂未特别注明要求时 , 均为符合国家标准的分析纯试剂 ,所使用的水均为符合国家GB/T 6682 规定的一级水。
5 .1 试剂
5 .1 .1 壬酸甲酯(C10 H20 O2 ,CAS号 :1731__84__6 ,纯度 >99%)。
5 .1 .2 甲基叔丁基醚(MTBE,C5 H12 O,CAS号 :1634__04__4 ,色谱纯)。
5 .2 材料
5 .2 .1 研钵
5 .2 .2 量筒 :规格为 10 mL和 100 mL
5 .2 .3 进样瓶 :规格为 2 mL
5 .2 .4 离心管 :规格为 1 .5 mL
5 .2 .5 内插管 :规格为 200 μL
5 .3 标准品
以下标准品均为经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。 5 .3 .1 α_蒎烯(C10 H16 ,CAS号 :80__56__8 ,纯度 >98%)。
5 .3 .2 香桧烯(C10 H16 ,CAS号 :3387__41__5 ,纯度 >95%)。
5 .3 .3 β_月桂烯(C10 H16 ,CAS号 :123__35__3 ,纯度 >90%)。
5 .3 .4 d_柠檬烯(C10 H16 ,CAS号 :5989__27__5 ,纯度 >99%)。
5 .3 .5 γ_松油烯(C10 H16 ,CAS号 :99__85__4 ,纯度 >97%)。
5 .3 .6 (_)__芳樟醇(C10 H18 O,CAS号 :126__91__0 ,纯度 >98%)。
5 .3 .7 橙花醛(C10 H16 O,CAS号 :106__26__3 ,纯度 >95%)。
5 .3 .8 乙酸芳樟酯(C12 H20 O2 ,CAS号 :115__95__7 ,纯度 >97%)。
5 .3 .9 香叶醛(C10 H16 O,CAS号 :141__27__5 ,纯度 >95%)。
5 .3 .10 瓦伦烯(C15 H24 ,CAS号 :225__047__6 ,纯度 >70%)。
5 .3 .1 1 饱和烷烃混标(C7 _C40)。
5 .4 溶液
5 .4 .1 提取工作液
用 MTBE将内标壬酸甲酯稀释至 43 .75 μg/mL和 17 .50 μg/mL,分别为提取工作液 A 和工作液 B。
5 .4 .2 标准品储备液
分别吸取标准品各 5 .00 μL,用 MTBE分别定容至 10 mL。
6 仪器和设备
6 .1 天平
感量为 0 .01 g,用于称取样品 ;感量为 0 .000 1 g,用于称取标准品。
6 .2 超声波清洗器
功率以 450 W 为宜。
6 .3 气相色谱质谱联用仪(GC_MS)
气相色谱(GC) ,质谱(MS)。
6 .4 色谱柱
TR_5 色谱柱 ,30 m0 .25 mm0 .25 μm。
7 样品制备
7 .1 取样
7 .1 .1 果皮和叶片 :收集柑橘的果皮或叶片新鲜组织 ,用液氮快速研磨成粉末 ,称取 0 .10 g 样品粉末置于 2 mL离心管中 ,用提取工作液 A进行提取。
7 .1 .2 果肉和囊衣 :收集柑橘的果肉或囊衣新鲜组织 ,用液氮快速研磨成粉末 ,称取 1 .00 g 样品粉末置于 2 mL离心管中 ,用提取工作液 B进行提取。
7 .2 提取
向上述离心管中依次加入 500 μL超纯水和 500 μL提取工作液 ,涡旋混匀 ,然后于 4 ℃、450 W 功率下超声萃取 40 min, 随后在 4 ℃、12 000 r/min离心 10 min;
7 .3 上机
用 1 mL注射器吸取上述离心后的上清液 300 μL,经 0 .22 μm 有机相滤膜过滤至带内插管的 2 mL进样瓶中 ,准备 GC_MS分析。
8 检测
8 .1 仪器条件
8 .1 .1 气相色谱条件
为 50 ∶ 1;对于不含油胞的样品 ,选择不分流模式。 气相色谱柱升温程序应符合表 1 规定。
表 1 气相色谱柱升温程序
8 .1 .2 质谱条件
离子源温度 :260 ℃ ;传输线温度 :280 ℃ ; 电离能量 : 70 eV;扫描模式 :全扫模式 ; 质荷比扫描范围 : 45 amu ~ 400 amu。
8 .2 GC_MS分析
8 .2 .1 配制梯度标准使用液
取各标准品储备溶液用 MTBE稀释 ,分别配置成浓度为 13.44 μg/mL、26.88 μg/mL、53.75 μg/mL、
107 .50 μg/mL、215 .00 μg/mL 的梯度标准使用液。 根据挥发性物质在样品中的检测浓度范围对梯度标
准使用液的数量进行增删 ,使样品中挥发性物质的检测浓度处于梯度标准使用液的浓度范围内。
8 .2 .2 工作曲线的绘制
以 8 .2 .1 中各标准品梯度标准使用液的浓度与对应内标浓度的比值为横坐标 ,相应的定量离子峰面积为纵坐标 ,建立工作曲线。
8 .2 .3 GC_MS色谱图
在本文件规定的气相色谱质谱条件下 ,各目标化合物的色谱图见附录 A。
8 .3 样品挥发性物质的分析
按 7 的流程进行样品制备 ,按本文件 8 .1 的仪器条件参数进行 GC_MS分析。
9 物质鉴定
按 8 .2 获得的目标化合物色谱图和质谱信息进行挥发性物质的定性分析。 若有标准品 ,则与标准品的保留时间和质谱信息对比确定 , 标准品的保留时间和特征离子见附录 B;若无标准品 , 则基于 NIST/ EPA/NIH Mass Spectral Library和 Wiley Registry of Mass SpectralData谱库中标准质谱信息对比 ,对照目标化合物与饱和烷烃标准品的保留时间 ,计算目标化合物的保留指数。
以饱和烷烃在对应色谱柱的保留时间为参考 ,按公式(1)计算目标化合物的保留指数(RI)值。
式中 :
RI — 目标化合物 i 的保留指数 ;
n — 饱和烷烃的碳原子数 ;
Ti — 目标化合物 i 的保留时间 ,单位为分钟(min) ;
Tn — 含 n 个碳原子饱和烷烃的保留时间 ,单位为分钟(min) ;
T(n+1) — 含 (n+1)个碳原子饱和烷烃的保留时间 ,单位为分钟(min)。
计算结果保留整数。
样品中目标化合物的保留时间与期望保留时间(即其对应标准品工作液中的平均相对保留时间)的相对偏差应控制在 ±3%以内 ;样品中目标化合物的不同碎片离子丰度比与期望 Q 值(即其对应标准品工作液中碎片离子的平均离子丰度比)的相对偏差应控制在 ±30%以内。
10 结果计算
10 .1 挥发性物质质量浓度
若目标化合物有对应的标准品 ,按 8 .2 所绘制的工作曲线进行定量分析 ,可得目标化合物的真实质量
浓度 Pi。若目标化合物无标准品 ,则基于内标法定量。 样品中目标化合物的质量浓度 Pi 按照公式 (2)
计算。
式中 :
Pi — 样品中目标化合物i质量浓度的数值 ,单位为微克每毫升(μg/mL) ;
Ai — 样品中目标化合物 i 的定量离子峰面积 ;
Pis — 样品中目标化合物i对应内标物质量浓度的数值 ,单位为微克每毫升(μg/mL) ;
Ais — 样品中目标化合物 i对应内标物的定量离子峰面积 ;
b — 工作曲线的截距 ;
a — 工作曲线的斜率 ;
f — 样品稀释的倍数。
计算结果小数点后保留 2 位有效数字。
10 .2 挥发性物质含量
目标化合物 i在样品中的含量按公式(3)计算。
ω……………………………………… (3)式中 :
ω — 样品中目标化合物i含量的数值 ,单位为微克每克(μg/g) ;
V — 样品制备中的内标使用液体积的数值 ,单位为毫升(mL) ;
m — 样品质量的数值 ,单位为克(g)。
计算结果小数点后保留 2 位有效数字。
1 1 精密度分析
在重复性条件下 ,获得 2 次独立测试结果的含量绝对差值不超过其算术平均值的 10%。
12 质控
12 .1 空白分析
每批样品应至少做一个空白试验 ,空白值应低于方法检出限 ,否则结果无效。
12 .2 工作曲线
工作曲线的相关系数应 ≥0 .99 ,否则结果无效 ,应重新绘制工作曲线。
附录 A
(资料性)
目标化合物色谱图
目标化合物色谱图见图 A.1。
标引序号说明 :
1 —α一蒎烯 ; 7 — 橙花醛 ;
2 — 香桧烯 ; 8 — 乙酸芳樟酯 ;
3 —β一月桂烯 ; 9 — 香叶醛 ;
4 —d一柠檬烯 ; 10 — 瓦伦烯 ;
5 —γ一松油烯 ; M — 壬酸甲酯(内标物质)。
—:—色()图;色谱柱为 TRACE TR一5 色谱柱。
图 A.1 目标化合物色谱图
附录 B
(资料性)
柑橘 10 种主要挥发性物质保留时间和特征离子
柑橘 10 种主要挥发性物质保留时间和特征离子见表 B.1。
表 B.1 柑橘 10 种主要挥发性物质保留时间和特征离子
