中华人民共和国农业行业标准
NY/T 4847—2025
兽用抗菌药物敏感性折点制定技术指南
Guidelines for establishment of susceptibility breakpoints for
veterinary antimicrobial agents
2025-12-09 发布
2026-05-01 实施
中华人民共和国农业农村部发布
前言
本文件按照 GB/T 1 .1—2020« 标准化工作导则第 1 部分 : 标准化文件的结构和起草规则»的规定起草 .
请注意本文件的某些内容可能涉及专利 . 本文件的发布机构不承担识别专利的责任 .
本文件由农业农村部畜牧兽医局提出 .
本文件由全国兽药残留与耐药性控制专家委员会归口 .
本文件起草单位 : 中国兽医药品监察所、华中农业大学、中国农业大学、华南农业大学、上海市兽药饲料检测所 .
本文件起草人 :徐士新、郝海红、张纯萍、王鹤佳、赵琪、黄安雄、阮紫涵、吴聪明、廖晓萍、商军、黄玲利、王旭、王少林、王淑歌、邹紫莹 .
兽用抗菌药物敏感性折点制定技术指南
1 范围
本文件提供了兽用抗菌药物敏感性折点(以下简称 “折点”)制定和最终确定的指南 .
本文件适用于兽用抗菌药物流行病学界值、药动学/药效学界值、临床界值及其最终敏感性折点的制定 .
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 . 其中 ,注日期的引用文件 ,仅该日期对应的版本适用于本文件 ; 不注日期的引用文件 , 其最新版本(包括所有的修改本)适用于本
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件 .
3 .1
兽用抗菌药物 veterinary antimicrobialagents
用于治疗动物细菌、支原体、真菌等微生物感染的发酵或化学合成的药物 .
3 .2
敏感 susceptible,S
批准剂量的抗菌药物能有效治疗病原菌感染 .
3 .3
中介 intermediate, I
批准剂量的抗菌药物在感染部位蓄积或高于批准剂量用药时 ,能有效治疗病原菌感染 .注 :也用于预防微小的、不可控的技术参数等引起的判定差异 .
3 .4
耐药 resistant, R
批准剂量的抗菌药物无法抑制病原菌的生长 ,不能达到临床治疗效果 .
3 .5
最小抑菌浓度 minimalinhibitory concentration, MIC
抑制培养基中特定浓度病原菌生长所需的最低药物浓度 .
3 .6
抗菌后效应 postG antimicrobialeffect, PAE
病原菌接触抗菌药物一定时间 , 当药物去除后 ,病原菌生长受到持续抑制的效应 .
3 .7
肉汤稀释法 broth dilution
将特定浊度病原菌接种于含有梯度药物浓度的液体培养基中共同孵育 ,体外测定抗菌药物对病原菌的 MIC 的方法 .
注 :包括常量肉汤稀释法和微量肉汤稀释法 .
3 .8
琼脂稀释法 agardilution
将特定浊度病原菌接种于含有梯度药物浓度的琼脂平板上共同孵育 ,体外测定抗菌药物对病原菌的MIC 的方法。
3 .9
流行病学界值 epidemiologicalcutoffvalues, ECOFF
野生型界值 wild_type cutoffvalue, COWT
通过体外药物敏感性试验测定的无获得性耐药或非固有耐药的天然菌株对应的最高 MIC值。
3 .10
药动学/药效学界值 PK/PD cutoffvalue, COPK/PD
根据药物在动物体内(如血液或特定感染部位)的药物代谢动力学(pharmacokinetics, PK)与药物效应动力学(pharmacodynamics, PD)建立的 MIC值。
3 .1 1
临床界值 clinicalcutoffvalue, COCL
基于临床试验研究数据 ,达到期望的临床/微生物效应(如 90%或以上治愈率)所对应的特定病原菌MIC值。
3 .12
敏感性折点 susceptibilitybreakpoint
基于特定“药物动物病原菌 ”组合 ,在制定其 ECOFF(COWT)、COPK/PD和 COCL 的基础上 ,根据决策表确定的 MIC值。
注 :用于判断病原菌对药物是 S、I或 R。
3 .13
生理药物代谢动力学 physiologicalpharmacokinetics, PBPK
以生物体的生理学、解剖学特性和药物理化性质为研究基础的药物代谢动力学。
3 .14
群体药物代谢动力学 population pharmacokinetics, PPK
以群体为对象 ,将传统的药代动力学模型与群体统计学模型结合 ,研究药代动力学特性中存在的变异性 ,研究药物体内过程的群体规律、药代动力学参数的统计分布及其影响因素。
4 折点制定
4 .1 流行病学界值 (ECOFF)
4 .1 .1 药物敏感性试验的病原菌代表性
药物敏感性试验的病原菌代表性如下 :
a) 病原菌的区域代表性宜按 NY/T 4141 的规定执行 ;
b) 病原菌分离株宜注明来源 ,宜含一定比例近年分离的菌株 ;
c) 当病原菌以属分类 ,至少 300 株目标菌(如大肠杆菌、肠球菌等) ;
d) 当病原菌以种分类 ,至少 100 株目标菌(如金黄色葡萄球菌等)。
e) 当病原菌较难获得或苛养 ,至少 50 株 (如支原体等)。
4 .1 .2 药物敏感性试验的操作规范
按 NY/T 4142 或 NY/T 4143 的规定执行。
4 .1 .3 耐药性分析
对临床分离株的耐药性进行分析 ,宜包含一定比例的、已知耐药机制的分离菌株。 对于新型抗菌药物
4 .1 .4 流行病学界值的确定
4 .1 .4 .1 MIC值直方图展示
的指示菌 ,分别展示该属及其属内各菌种的 MIC值分布直方图。 采用 Kolmogorov_Smirnov拟合度分析
和非线性回归分析两步法等方法获得 ECOFF。
4 .1 .4 .2 KolmogorovGSmirnov拟合度分析
对 MIC分布进行以 2 为底的对数转化 ,选择 Kolmogorov_Smirnov方法进行拟合度检验 ,检验实际分布与正态分布模型的接近程度。 当分布呈现双峰或多峰形态 ,需剔除非天然菌株数据后重新作图计算。
4 .1 .4 .3 非线性回归分析
对符合正态分布的 MIC值进行非线性回归分析 , 获得修正后的平均值、标准差和病原菌株总数。 对
MIC值分布频率依次进行拟合 ,每次递增一个 MIC,进行多次修正 ,直至拟合的天然病原菌总数与实测病
原菌总数差别最小 , 得到最佳拟合度的天然病原菌 MIC 分布。 选择 95%置信区间对应的 MIC 值为
ECOFF。
4 .2 药动学/药效学界值 (COPK/PD)
4 .2 .1 基本要素
COPK/PD 的建立需要体外药物效应动力学(包括 MIC和抗菌作用类型等)、药物在动物血液或感染部位的药物代谢动力学(PK)数据、药物代谢动力学/效应动力学(PK/PD)指数及其目标值。
4 .2 .2 药物效应动力学(PD)
4 .2 .2 .1 病原菌的最小抑菌浓度(MIC)
按照 4 .1 .2 的规定进行测定。
4 .2 .2 .2 抗菌后效应(PAE)
将药物与病原菌混合培养 ,在适宜条件下培养一定时间后 ,通过反复洗涤、药物钝化或稀释(100 倍 ~ 1 000 倍稀释)将药物快速去除 ,继续监测病原菌生长动力学曲线。 按公式(1)计算 PAE。
PAE=T-C…………………………………………… (1)
C — 同时间下 ,对照组细菌对数生长 ,数目增加 10 倍所需时间 ,单位为小时(h)。
4 .2 .2 .3 确定抗菌作用类型
梯度药物浓度与病原菌共同孵育 ,计数 24 h 内 (根据病原菌种类调整孵育时间)不同时间点病原菌对
数减少量 ,绘制杀灭曲线 ;根据高浓度药物(特别是大于 4 倍 MIC)处理后的杀菌速率与程度 ,确定是浓度
依赖型或时间依赖型药物。 不同药物对特定病原菌具有不同作用特点 ,不能用一类药物作用特点代替某
种药物。
4 .2 .3 药物代谢动力学 (PK)
4 .2 .3 .1 绘制药时曲线并获得主要 PK参数
建立血浆(或感染部位)中抗菌药物浓度检测方法(如高效液相色谱法等)。 以特定给药途径单剂量或多剂量给药后 ,测定受试动物体内血浆(或感染部位)药物浓度随时间变化趋势 ,绘制药时曲线 ;应用药物代谢动力学软件 ,获得 PK参数及其平均值和标准差 ,包括药时曲线下面积(AUC)、达峰浓度(Cmax)、达峰时间(Tmax)、消除半衰期(T1/2)、总清除率(CL)和稳态分布容积(VDss)等。
4 .2 .3 .2 PK 受试动物
PK受试动物如下 :
a) 主要从健康动物获取 ,条件允许下使用患病动物 PK数据 ;
b) 尽量考虑年龄、体重、性别等与预期治疗相关的其他协变量因素。
4 .2 .3 .3 血液或感染部位 PK数据的选择
血液或感染部位 PK数据的选择如下 :
a) 提供药物(包括具有抗菌活性的主要代谢物)在动物靶器官的代谢和排泄数据 ; 可以通过特定的
生理药动学模型(PBPK模型) ,根据原形药物和/或其活性代谢物在血清或血浆中的浓度预测感染部位的浓度 ;
b) 如果感染部位与血液中的药物浓度相关 ,直接用血液中的 PK数据 ;
c) 如果药物能从血液分布到全身 ,需用生理药动学模型 ,预测感染部位的药物浓度 ;
d) 对于中枢神经系统等特殊部位的感染 ,或胞内和局部脓肿感染等 ,宜测定特定部位药物浓度 ,示例 :用于治疗乳腺炎的药物 ,直接测定哺乳期乳汁中的药物浓度数据 ;
e) 用于尿路感染的治疗药物 ,提供尿液中的 PK数据 ,并包括 pH 和阳离子对尿液中抗菌活性的影响等。
4 .2 .3 .4 计算药物游离分数及测定游离药物浓度
药物浓度以总药物和游离药物的形式表示。 通过靶动物血清或其他体液(如乳汁等)中药物与蛋白质
4 .2 .4 PK/PD指数的选择
4 .2 .4 .1 时间依赖型药物
a) 若药物有较长抗菌后效应(PAE) ,选择游离药物的药时曲线下面积 fAUC与 MIC 比值(fAUC/ MIC)作为 PK/PD指数 ;
b) 若药物没有较长 PAE,选择游离药物浓度超过 MIC 的时间(fT>MIC)作为 PK/PD指数。
4 .2 .4 .2 浓度依赖型药物
选择游离药物的药时曲线下面积 fAUC 与 MIC 比值(fAUC/MIC)或者游离药物峰浓度 fCmax 与MIC 的比值(fCmax/MIC)作为 PK/PD指数。
游离药物的 fAUC/MIC能作为通用 PK/PD指数。
4 .2 .5 设定 PK/PD 目标值
在体外(invitro)、半体内(exGvivo)或体内(in vivo)杀菌模型中 ,测定不同药物浓度(或不同时间特定部位的药物浓度)与病原菌共同孵育后的杀菌效应。 按公式(2)Emax方程计算 PK/PD 目标值。
式中 :
E — 药物病原菌共孵育后 ,病原菌浓度与初始接种浓度对数值的差值 ;
E0 — 未经药物处理的病原菌培养后其浓度值与初始接种浓度对数值的差值 ;
Emax — 样品中初始接种病原菌培养后其浓度最大变化值 ;
C —PK/PD指数 ;
EC50 — 样品中达到最大杀菌效应一半时的 PK/PD指数值 ;
N — Hill系数 ,PK/PD指数与效应直线化后的斜率。
Emax和 E0 通过杀菌曲线试验直接获得 ,EC50 和 N 需通过软件拟合得到。 Hill方程拟合完成后 ,利用
m制ax方、。, 3-)、4P
4 .2 .6 群体药物代谢动力学(PPK)
当疾病或其他因素导致药物在靶动物体内暴露量变化较大 ,宜进行 PPK研究。
按照稀疏点采样的方法 ,采集不同时间点血样或组织样品 , 同时收集试验动物的各种协变量信息 ,建立 PPK模型 ;收集尽可能多试验动物的药物敏感性试验结果(血和感染部位) ,进行 PPK/PD研究。
4 .2 .7 PK/PD界值(COPK/PD)的确定
使用 PK数据和 MIC分布数据 ,进行蒙特卡洛(Monte Carlo)模拟 , 每个 MIC值模拟 10 000 头健康
动物 PK/PD指数的分布概率 , 分析每个 MIC达到 4 .2 .5 中 PK/PD 目标值的达标概率(probability of
targetattainment,PTA) . 取达标概率大于 90%的最大 MIC值作为 COPK/PD .
4 .3 临床界值(COCL)
4 .3 .1 基本要素
进行靶动物目标菌感染疗效试验 ,或通过调研药物开发文献和申报资料 ,获得制定临床界值的基础数据 . 综合考虑临床病原菌 MIC 分布和临床治愈率(probability of cure, POC)等基本要素来制定临床界值 .
4 .3 .2 临床试验的原则
4 .3 .2 .1 感染菌株的选择
临床试验感染目标菌株至少涵盖 5 个不同的 MIC,每个 MIC菌株的感染病例数 ≥5 .
4 .3 .2 .2 临床试验的区域性
宜注意各区域数据的差异性 ,包括微生物的流行分布、动物种属、研究条件、剂量方案等的差异 . 不同区域的数据宜单独列出 ,但如果能够确定此类数据的等效性 ,建议合并分析 .
4 .3 .2 .2 临床方案的详细性
详细描述临床试验方案 ,包括动物种属、种群、药物剂量、用药时间和对照药等 ;治疗前、中和后的微生物学和临床评估频次、评价标准、临床预后和细菌学预后以及允许的辅助治疗措施等 .
4 .3 .2 .3 临床预期的相关性
数据资料必须与临床用药的预期用途相关 . 所用病原菌应与预期感染相关 ,排除正常菌群污染 . 对于与药物的预期用途不相关的病原菌(即标签外病原菌) ,敏感性数据宜表示为实际 MIC散点图 . 生成并记录药敏测定的质控数据 .
4 .3 .2 .4 临床疗效的全面性
针对个体动物的临床预后(治愈、改善、无效)和微生物学预后 ,分析药物敏感性数据 . 根据临床预后数据 ,将临床 “治愈 ”和临床 “改善 ”单独分析 . 微生物学预后数据和临床疗效数据一起提交 . 如果临床和/或微生物学无效 ,则单独提交感染病原菌的 MIC和感染部位等信息 .
4 .3 .3 临床试验数据的统计分析
4 .3 .3 .1 统计方法
可通过“WindoW”法和非线性回归分析方法分析临床菌株 MIC和临床治愈率的关系 , 以确定临床界值 COCL .
4 .3 .3 .2 “WindoW”法
将 MIC值与临床疗效(治愈率或失败率)对应列表 ,计算治愈和失败率最大差异值 MaxDiff,计算累计效应曲线下面积比值 CAR(CalculateAUCSucc/AUCTotal) . 以 MaxDiff和 CAR对应的 MIC值之间的范围为临床界值的选择窗“WindoW”.
a) 最大差异值 MaxDiff的确定 : 统计每个 MIC对应的治愈数、失败数和总数 ,计算小于等于每个
MIC 的治愈率(%Success≤ MIC)和大于每个 MIC 值的治愈率(%Success>MIC) , 获得每个
MIC对应的治愈率和失败率差值= (%Success≤MIC)- (%Success>MIC) ,选出最大差异值
b) 累计效应曲线下面积比值 CAR 的确定 : 以 MIC为横轴 , 以治愈数和总例数为纵轴 ,绘制趋势线 ,计算每个 MIC对应的累计治愈曲线下面积(AUCSuccess)与累计总曲线下面积(AUCTotal) . CAR值为最小 AUCSuccess/AUCTotal 比值 . CAR 对应的 MIC 的病例数不少于 5 . 见附录 C 的计算示例 .
4 .3 .3 .3 非线性回归分析
使用非线性回归分析 ,对数据进行拟合 . 以 MIC为自变量 , 以治愈率(POC)为因变量 ,得到拟合方程式 (3) .
POC (3)
式中 :
a — 表示测试药物效应或上限效应 ;
b — 表示敏感性 , 即 MIC/效应曲线的斜率 ;
f(MIC) — 表示临床试验中分离株的 MIC。
按公式(3) ,计算治愈率设定为 90%时所对应的 MIC值。
见附录 D 的计算示例 ,对 MIC进行 log2 处理后 ,与 POC进行非线性回归拟合。
4 .3 .4 临床界值(COCL)的确定
如果非线性回归分析确定的 MIC值在“WindoW”选择窗内 , 即为临床界值(COCL) ; 如果非线性回归分析确定的数据不在“WindoW”选择窗内 ,需检查试验数据并补充完善实验数据后重新计算。
5 敏感性折点的最终确定
5 .1 基于两种界值决策折点
基于两种界值决策折点如下(见表 1) :
a) 当 COCL数据缺乏时 ,尽可能收集药物代谢动力学、药物效应动力学、临床前数据等 ,构建临床群体 PK/PD模型 ,应用蒙特卡洛分析 ,获得 COPK/PD , 以此确定初始折点。
b) 当 COPK/PD
c) 当 COPK/PD>ECOFF时 ,如该药 COPK/PD/ECOFF的比值小于已知同类化学结构相近药物的折点/ECOFF的值 ,可选择 COPK/PD作为初始折点 ; 如 COPK/PD/ECOFF 的值过大 , 需分析原因 , 必要时重复部分试验。
表 1 基于两种界值制定折点决策表
5 .2 基于三种界值决策折点
对流行病学界值(ECOFF)、药动/药效学界值(COPK/PD)和临床界值(COCL)综合权衡后 ,根据决策表最终确定折点。
a) 当 ECOFF = COCL时 ,ECOFF或 COCL 即为最终折点 ;
表 2 基于三种界值制定折点决策表
附录 A
(资料性)
泰万菌素对鸡毒支原体的 MIC值分布直方图和累积分布直方图
泰万菌素对鸡毒支原体的 MIC值分布直方图和累积直方图分别见图 A.1、图 A.2。
图 A.1 泰万菌素对鸡毒支原体的 MIC分布直方图
图 A.2 泰万菌素对鸡毒支原体的 MIC 累积分布直方图
附录 B
(资料性)
临床界值制定过程中 MaxDiff的计算过程示例
临床试验 MaxDiff的计算结果见表 B.1。
表 B.1 临床试验 MaxDiff计算结果
当 MIC≤0 .03 μg/mL时 , (%Success≤MIC)= 36/40×100= 90 , (%Success>MIC) = (108+34+
率差值 ,找到最大差异值 MaxDiff值。
附录 C
(资料性)
临床界值制定过程中 CAR 的计算过程示例
CAR方法的图解说明见图 C.1 , 临床试验 CAR计算结果见表 C.1。
图 C.1 CAR方法的图解说明
表 C.1 临床试验 CAR计算结果
当 MIC为 0 .5 μg/mL、1 μg/mL、4 μg/mL、8 μg/mL、16 μg/mL时 ,总病例数少于 5 例 ,不能选择该5 个 MIC所对应的 CAR值 , 因此选择 0 .839 为最小 CAR值 , 即 MIC为 0 .25 μg/mL时所对应的 CAR值最小。
附录 D
(资料性)
非线性回归方程分析的计算示例
利用软件中的非线性回归对其所得数据进行拟合 ,如图 D.1 所示 , 以 Log2 MIC为自变量 ,POC为因
结,,自(程2Mb,2 /)模,。
该小于 B μg/mL。
图 D.1 临床数据的非线性回归模拟
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