抗FIXa×FX双特异性抗体生物学活性分析方法的建立

目的:建立抗FIXa×FX凝血因子双特异性抗体(Bispecific Antibody,BsAb)生物学活性分析方法,并对方法进行验证。方法:利用酶学显色原理,双特异性抗体作为桥连因子其Fab端分别连接凝血因子IXa(FIXa)和X(FX),并将FX激活为FXa,催化底物显色,获得相对活性值。并对分析方法进行专属性、准确度、精密度、线性范围及方法稳定性验证。结果:抗体在该方法下存在量效关系并能够准确测定其生物学活性。该方法能够测定与Human FⅧ功能相似的抗FIXa×FX抗体的生物学活性;在60%~150%效价水平范围内,对候选抗体进行8次测定,回收率在91.41%~97.86%;各效价水平相对偏倚(RB)均在±12%范围内,相对效价理论值与实测值直线回归分析相关系数(R 2)为0.9969;各效价水平8次结果相对标准偏差(RSD)均小于10%,几何变异系数(GCV)均小于20%;对样品进行热处理后能够准确评价活性的检出能力。结论:研究建立的抗FIXa×FX的双特异性抗体生物学活性分析方法具有良好的专属性、准确性、精密度及线性范围,该法能够用于抗FIXa×FX抗体的生物学活性评价。

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本文档关键词:抗体,活性,特异性,分析,生物学