CRISPR-Cas12a检测牛奶中大肠杆菌方法的建立与评价

为提高牛奶中大肠杆菌的检测效率,简化分析流程,该文建立基于成簇的规则间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)的牛奶中大肠杆菌快速检测体系。首先,构建CRISPR相关蛋白(CRISPR-associated protein,CRISPR-Cas),CRISPR-Cas12a的重组表达质粒,并将其转化至BL21感受态细胞,利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(lsopropyl β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导表达Cas12a蛋白。然后,通过麦芽糖结合蛋白(maltose binding protein,MBP)亲和层析、凝胶过滤层析等方法将Cas12a蛋白进行纯化。最后,设计靶向大肠杆菌16S rDNA目的片段的特异性CRISPR RNA (crRNA),将特异性的crRNA、大肠杆菌16S rDNA的聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)胶纯化产物和纯化的Cas12a蛋白进行混合,建立CRISPR-Cas12a靶向切割体系。验证结果显示该体系可用于检测牛奶样品中的大肠杆菌。

资料为PDF文档格式.

本文档关键词:大肠杆菌,牛奶,建立,CRISPR,Cas12a