构建靶向小鼠Slc39a4基因的CRISPR_Cas9系统及打靶功能验证

目的:构建靶向小鼠Slc39a4基因的CRISPR/Cas9系统并在细胞水平上对其打靶功能进行验证。方法:参考数据库中人SLC39A4强致病位点,对比分析人和小鼠Slc39a4蛋白序列,将人强致病位点定位于小鼠基因组上。根据定位区域的小鼠基因组DNA序列,设计3个向导RNA(small guide RNA,sgRNA)序列,构建表达载体。通过细胞转染、药物筛选,获得阳性细胞。利用PCR扩增、T7 Endonu-clease酶切反应和TA克隆测序分析打靶情况以及打靶位点的基因型和编辑效率。结果:成功构建了3个sgRNA,sgRNA3导向序列可诱导Cas9蛋白打靶小鼠Slc39a4基因,打靶效率为30%。结论:成功构建靶向小鼠Slc39a4基因的CRISPR/Cas9系统,为制备SLC39A4基因编辑动物模型,深入研究SLC39a4基因的致病机理奠定基础。

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本文档关键词:打靶,验证,构建,基因,功能