本文件是T/CITS团体标准，旨在规范循环肿瘤细胞（CTC）检测技术的质量保证要求，适用于医疗机构开展CTC检测的全过程。它由多个权威单位（如中国医学科学院肿瘤医院、杭州华得森生物技术有限公司等）起草，中国检验检测学会归口，并参考了多项国家标准和行业规范。文档的核心目标是确保CTC检测的准确性、可靠性和安全性，涵盖风险管理、通用操作规范、技术性能验证和结果判读等关键环节。
1. 范围
文档规定了CTC检测技术质量保证的全过程要求，包括风险管理、通用操作、技术性能和结果判读。适用于医疗机构开展CTC检测的质量控制工作，但不涉及非实体肿瘤的CTC检测。范围强调了对检测系统建立、运行和变更的全面覆盖，确保检测结果符合医学决策需求。
2. 规范性引用文件
文档引用了多项标准作为规范性依据，包括：
- GB 39707：医疗废物处理处置污染控制标准，用于指导检验后标本的处置。
- GB/T 42060：医学实验室样品采集、运送、接收和处理的要求，用于标本采集环节。
引用文件的最新版本（包括修改单）均适用，确保标准与现行法规保持一致。
3. 术语和定义
文档明确定义了关键术语，为后续要求提供基础：
- 循环肿瘤细胞（CTC）：从实体肿瘤病灶（原发或转移灶）脱落并进入外周血的肿瘤细胞。
- 质量保证（QA）：质量管理的一部分，致力于满足质量要求并提供信任。
- 医学决定水平（MDL）：对疾病诊断、治疗或排除起决定作用的被测成分浓度（数量）。这些定义源自相关标准（如T/CITS 235-2025），确保术语使用的一致性。
4. 风险管理
风险管理是文档的核心章节，分为新建立/变更风险管理和运行风险管理：
- 4.1 新建立或变更引发的风险管理要求：实验室新建CTC检测系统或主要系统/环境发生变更时，必须进行全面性能验证。验证方案需进行风险评估，重点关注潜在错误来源（如试剂不稳定或软件故障）。
- 4.2 运行中的风险管理要求：
- 日常检测中，需评估所有风险并制定管理措施，防止不正确、延迟或信息错误的结果。
- 风险识别包括：
- 异常故障状态：如批间不一致、试剂非特异性、标本污染、系统故障等。
- 正常使用中的潜在风险：如测量不确定度、干扰物质影响（如药物荧光干扰）、标本基质多变等。
- 医学实验室错误使用：如忽视特殊要求、操作顺序错误、数据输入错误或标本量不足。
- 风险管理强调预防性措施，例如定期审核和人员培训。
5. 通用要求
通用要求覆盖检测全流程，确保基础操作规范：
- 5.1 标本采集要求：依据GB/T 42060，关键点包括：
- 使用合适抗凝采血管（如EDTA-K2或ACD），确保采血管洁净。
- 采集时做好防护（如手套），结束后洗手。
- 标本需及时送检和处理，必要时按说明书保存；实验室应制定接收/拒收标准，并可要求重新采集。
- 临床医生根据患者治疗周期选择采血部位和时间点，保持采集条件相对固定。
- 5.2 检验质量控制要求：
- 制定全流程标准操作规程（SOP），定期审核和培训。
- 确保设备、试剂、耗材和环境满足检测需求（包括安全性）。
- 人员定期进行能力评估；检测方法学需预先验证性能。
- 每批次试验设置有效阳性/阴性对照；通过室间质量评价（如比对）评估准确性。
- 图像自动判读时，纳入软件质控（如荧光显微镜通道匹配、光源使用时间），并保存相关参数。
- 5.3 结果报告要求：报告内容必须包括患者信息、标本信息、数值报告、图像报告（如适用）和解释性注释，确保结果可追溯和临床可应用。
- 5.4 检验后标本保存和处置要求：
- 规定标本保存时限和储存条件，明确来源识别和附加检测适宜性。
- 废弃处理严格遵循《医疗废物管理条例》和GB 39707，防止污染。
6. 检测技术要求
技术要求聚焦于性能验证，确保检测准确可靠：
- 6.1 正确度：
- 通过回收试验评价系统误差，使用标准品（常用癌种细胞系，见表1）模拟血样。
- 低（MDL范围内）、中（<100个）、高（≥100个）浓度水平各检测3次：低值回收率≥50%，中高值≥75%。
- 标准品细胞系示例：乳腺癌（如SKBR3）、结直肠癌（如HT-29）、肺癌（如PC9）等，需匹配癌种。
- 6.2 重复性：
- 低、中、高浓度标准品各检测10次以上，计算变异系数（CV）或极差：低值CV≤45%或极差≤1/2 MDL；中高值CV≤15%。
- 6.3 线性（适用时）：
- 标准品从高（1000-2000个）到低（1-9个）稀释5-7个水平，评估回收数量与投入数量的线性；相关系数应≥0.975。
- 6.4 最低检测限：
- 将不同数量标准品投入健康人血样，检测可获取的最低检测数量。
- 6.5 检测特异性：
- 使用非CTC特征细胞或健康人血样检测，结果必须为阴性（未检出），确保方法无交叉反应。
7. 检测结果判读
判读要求确保结果准确性和一致性：
- 7.1 通用要求：
- 每例标本至少由两名有资质人员盲法判读；差异较大时，第三人复检并记录。
- 异常或可疑结果需及时复查验证，排除操作失误或设备故障。
- 7.2 免疫荧光染色判读：
- 通用型判读：结合免疫荧光染色与细胞核形态（排除U型或马蹄型白细胞）；使用固态光学质控品调节显微镜；建立干扰物质清单（如荧光药物需停药≥7天）。
- 特殊表型判读（如PD-L1、Her2）：在通用型基础上追加染色，注意荧光通道干扰；对表达量定性分析时，设置参考标准（如Her2+++、++、+）；相对荧光强度计算：
A/B（A为细胞平均荧光强度，B为背景强度），阳性阈值参考细胞系数据。
- 7.3 荧光原位杂交判读：
- 通用型判读：计数杂交信号，基于阈值（cut-off值）判定阳性；信号需清晰、背景无干扰；细胞核完整可判读；阳性信号定义（如缺失：1个信号点；扩增：≥3个信号点）。
- 特殊探针判读：
- 扩增探针：区分多倍体与异常扩增。
- 缺失探针：观察信号点大小，必要时分子确认。
- 融合探针：信号点重合判阳性。
- 分离探针：信号点距离>单点大小的2倍判阳性。
- 特定基因探针（如3p22.1/10q22.3）：结合临床意义和试剂说明书。
参考文献
文档引用了多项支持性标准与文献，包括：
- 国家标准：如GB/T 19000（质量管理）、WS/T 492（精密度验证）、YY/T 1459（基因杂交试剂盒）。
- 行业指南：如《定量检测体外诊断试剂分析性能评估注册审查指导原则》（国家药监局）。
- 学术文献：如董周寰等的《荧光原位杂交检测技术共识》，以及临床研究（如Genetically abnormal circulating cells in lung cancer patients）。
这些参考文献提供理论基础和实践指导，确保标准科学性和可操作性。
总结评述
本团体标准全面构建了CTC检测技术的质量保证框架，强调风险管理、过程控制和性能验证。其突出特点是：
- 系统性：覆盖检测全周期（从标本采集到结果判读），确保各环节无缝衔接。
- 严格性：技术参数（如正确度、重复性）有量化要求，提升检测可靠性。
- 实用性：结合临床实际（如癌种细胞系选择），并参考多项国家标准，便于医疗机构实施。
通过遵守本标准，实验室可有效降低错误风险，提供高质量的CTC检测服务，支持肿瘤诊断和治疗的精准性。
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