YY/T 1946-2024 肿瘤组织基因突变检测试剂盒(高通量测序法)

中华人民共和国医药行业标准
ICS 11.100.10
CCS C 44
YY/T 1946—2024
肿瘤组织基因突变检测试剂盒
（高通量测序法）
Gene mutation in tumor tissue detection kit
（high⁃throughput sequencing）
2024⁃09⁃29 发布2025⁃10⁃15 实施
国家药品监督管理局 发 布
YY/T 1946—2024
目　　次
前言··························································································································Ⅲ
引言··························································································································Ⅳ
1　范围·······················································································································1
2　规范性引用文件········································································································1
3　术语和定义··············································································································1
4　缩略语····················································································································2
5　要求和试验方法········································································································3
6　标签和使用说明书·····································································································7
7　包装、运输和贮存······································································································7
附录A（ 资料性）　第二代EGFR/ALK/MET 基因突变检测国家参考品····································8
附录B（ 资料性）　第二代KRAS/NRAS/BRAF/PIK3CA 基因突变检测国家参考品···················13
附录C（ 资料性）　肿瘤突变负荷国家参考品······································································16
附录D（ 资料性）　微卫星不稳定性（MSI）检测国家参考品····················································19
附录E（ 资料性）　试验过程中的关键注意事项···································································22
附录F（ 资料性）　试剂盒设计开发中的阳性判断值研究和性能评价方法··································23
参考文献····················································································································25
Ⅰ
YY/T 1946—2024
前 言
本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则　第1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规
定起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由国家药品监督管理局提出。
本文件由医用高通量测序标准化技术归口单位归口。
本文件起草单位：北京吉因加医学检验实验室有限公司、中国食品药品检定研究院、北京市医疗器
械检验研究院（北京市医用生物防护装备检验研究中心）、北京协和医院、中国医学科学院肿瘤医院、复
旦大学附属肿瘤医院、南京世和基因生物技术股份有限公司、臻悦生物科技江苏有限公司、厦门飞朔生
物技术有限公司、上海思路迪生物医学科技有限公司、北京优迅医疗器械有限公司。
本文件主要起草人：易鑫、贾峥、王瑞霞、梁智勇、应建明、周晓燕、邵阳、郑杉、陈琰、关丽、单光宇、
易玉婷、楚玉星、苑富强、于婷、曲守方、黄杰。
Ⅲ
YY/T 1946—2024
引 言
本文件中的肿瘤组织基因突变检测试剂盒（高通量测序法）是指将核酸片段转化为可测序文库的
试剂盒，它的组成主要包括脱氧核糖核苷三磷酸、连接酶、聚合酶、接头、引物、探针等。
需要重点强调的是，体外诊断检测系统是可完成从样本处理到最终结果报告所有阶段的组合。例
如，肿瘤组织基因突变检测（高通量测序法）检测系统除了包括本文件所指的试剂盒以外，还包括核酸
提取试剂盒、基因测序仪、测序试剂、数据分析软件等部分，在设计开发和验证时，需采用完整、确定的
检测系统进行分析性能评估，完成对检测系统各部分的评价。
在临床应用过程中，随着技术发展、临床研究的深入，使得建库方法、数据分析软件、数据库等存在
更新的需求，建议开发者在对产品设计、生产工艺及质量控制等不断深入理解的基础上，主动对已上市
产品进行持续改进和创新。根据体外诊断试剂生产质量管理相关要求，当上述变化可能影响产品安全
性、有效性时，需评价变化可能带来的风险，必要时采取措施将风险降至可接受水平，同时需符合相关
法规的要求。
本文件基于高通量测序技术应用和验证数据而制定，供体外诊断试剂的制造商和医学检验实验室
等使用。
Ⅳ
YY/T 1946—2024
肿瘤组织基因突变检测试剂盒
（高通量测序法）
1　范围
本文件界定了肿瘤组织基因突变检测试剂盒（高通量测序法）（以下简称“试剂盒”）的术语和定义，
规定了相关要求、标签和使用说明书以及包装、运输和贮存，并描述了相应的试验方法。
本文件适用于使用基于探针捕获法或多重PCR 法的高通量测序的试剂盒，该试剂盒用于检测肿
瘤患者的福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织样本中的单核苷酸变异（SNVs）、插入缺失变异（Indels）、
拷贝数变异（CNAs）、基因融合（Fusions）、肿瘤突变负荷（TMB）和（或）微卫星不稳定性（MSI）。本文
件也适用于肿瘤组织‑对照样本配对检测的试剂盒。
本文件不适用于采用全外显子组测序以及采用单分子测序技术进行肿瘤基因突变检测的试剂盒。
注： 对照样本可能是全血或癌旁组织样本，主要用于区分肿瘤FFPE 组织样本检测中的胚系突变。
2　规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文
件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于
本文件。
GB/T 191　包装储运图示标志
GB/T 29791.2　体外诊断医疗器械　制造商提供的信息（标示）　第2 部分：专业用体外诊断试剂
3　术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1　
高通量测序　high⁃throughput sequencing
区别于传统双脱氧（Sanger）测序，一种能够一次并行对大量核酸分子进行平行序列测定的技术，
通常一次测序反应能产出不低于100Mb 的测序数据。
[来源：GB/T 40664—2021， 3.8]
3.2　
单核苷酸变异　single⁃nucleotide variants；SNVs
基因组上同一位置单个核苷酸碱基替换所产生的变异类型。
3.3　
插入缺失变异　insertion and deletion alterations； Indels
基因组中插入或缺失一个或多个碱基所产生的变异类型。
注： 通常指1 个~50 个碱基。
1
YY/T 1946—2024
3.4　
拷贝数变异　copy number alterations；CNAs
基因组中特定片段的拷贝数量发生变化所产生的变异类型。
3.5　
基因融合　gene fusions；Fusions
由于染色体重排（重复、缺失、倒位和易位）导致的两个或多个基因的DNA 序列直接相连，置于同
一套调控序列（包括启动子、增强子、核糖体结合序列、终止子等）控制之下，构成嵌合基因所产生的变
异类型。
注： DNA 水平对基因融合的检测是根据其在DNA 水平上的特征检测基因重排（gene rearrangements）信号。
3.6　
肿瘤突变负荷　tumor mutational burden；TMB
肿瘤基因组中体细胞突变的数目。
注： 通常用每百万碱基的基因组编码序列中被检测出的体细胞突变数目表示（Muts/Mb）。
3.7　
微卫星不稳定性　microsatellite instability；MSI
当DNA 错配修复（mismatch repair，MMR）系统功能异常时，微卫星出现的复制错误得不到纠正
并不断累积，使得微卫星序列长度或碱基组成发生改变。
注： 微卫星序列是指存在于基因组中少数几个核苷酸为单位（多为1 个~6 个）的串联重复DNA 序列。
3.8　
测序深度　sequencing depth
待测样本中某个指定的核苷酸被检测的次数。
示例： 通常用多少乘表示，如100 乘，写作100×。
[来源：GB/T 30989—2014， 3.31]
3.8.1　
有效测序深度　unique sequencing depth
经过数据过滤和序列比对去除重复序列之后得到的测序深度。
3.8.2　
原始测序深度　raw sequencing depth
未经过数据过滤和序列比对去除重复序列的测序深度。
3.9　
覆盖均一性　coverage uniformity
测序过程中目标区域之间序列覆盖的均匀性，是测序读段（reads）在目标区域的测序深度均匀程度
的度量。
3.10　
肿瘤纯度　tumor purity
肿瘤细胞核占检测样本全部细胞核的比例。
4　缩略语
下列缩略语适用于本文件。
FFPE——福尔马林固定石蜡包埋（formalin‑fixed and paraffin‑embedded）
MSI‑H——微卫星高度不稳定性（microsatellite instability‑high）
MSS——微卫星稳定（microsatellite stability）
2
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PCR——聚合酶链反应（polymerase chain reaction）
TMB‑H——高肿瘤突变负荷（high tumor mutational burden）
TMB‑L——低肿瘤突变负荷（low tumor mutational burden）
5　要求和试验方法
5.1　外观
5.1.1　要求
试剂（盒）应符合制造商规定的外观要求；试剂（盒）各组分应齐全、完整，无液体渗漏；包装标签应
清晰，无磨损。
5.1.2　试验方法
在自然光下，以正常视力或矫正视力目视检查。
5.2　试剂盒的质量控制
5.2.1　要求
试剂盒应根据预期用途、性能要求等，建立完善的质量标准，包括但不限于以下内容。
a） 应建立碱基识别质量要求：Q30>80%。
b） 对于DNA 水平的基因突变检测，应建立目标区域的测序深度要求，其不应低于理论最小有
效测序深度：
1）　探针捕获法：预期SNVs/Indels/Fusions 的检测限不高于2.5% 时，目标区域的平均有效
测序深度不宜低于500×；
2）　多重PCR 法：预期SNVs/Indels/Fusions 的检测限不高于2.5% 时，目标区域的平均有
效测序深度不宜低于500×或平均原始测序深度不宜低于800×。
c） 对于DNA 水平的检测，应建立目标区域的覆盖均一性要求：
1）　探针捕获法：≥20% 目标区域的平均有效测序深度占比不宜低于95%；
2）　多重PCR 法：≥20% 目标区域的平均原始测序深度占比不宜低于75%。
d） 对于RNA 水平的融合基因检测，应建立至少包括内参基因（管家基因）和测序数据量（按
reads 数计算）的要求。
注1： 不适用于Q30 的测序仪平台，需建立其他合理的碱基识别质量要求。
注2： 理论最小有效测序深度由二项分布公式基于最低检测限和阳性判断值计算所得。Fusions 的目标区域相对复
杂，为了保障每个位点达到相应的深度，对于样本的平均深度具有更高的要求。作为同时检测不同变异类型
的产品，需综合考虑每种变异类型，以确定最终的测序深度要求。
5.2.2　试验方法
按照制造商提供的方法进行试验，检查质量控制文件。
5.3　建库质量
5.3.1　要求
应规定文库构建成功率。
使用国家参考品或企业参考品进行检测时，文库构建成功率应高于98%。
3
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使用临床样本进行检测时，临床样本的文库构建成功率宜根据临床数据统计后给出。
注： 本文件中涉及国家参考品时参考附录 A~附录D；当国家参考品发生换代时，以最新的国家参考品使用说明书
为准。
5.3.2　试验方法
按照制造商提供的方法进行试验。文库构建成功率为验证中使用的所有国家参考品或企业参考
品的单次文库构建成功的数目占所有文库构建的总数的百分比。
5.4　检测限
5.4.1　要求
5.4.1.1　SNVs/Indels/CNAs/Fusions
使用国家参考品或企业参考品中的检测限参考品在试剂盒最低样本输入量条件下进行检测，结果
应符合以下要求。
a） SNVs/Indels/Fusions：
1）　热点突变：使用不高于2.5% 突变频率的检测限参考品检测，试剂盒检测范围内标注的
基因突变位点均应检出；
2）　其他突变：位于复杂序列区域的热点突变（如TERT 启动子区域）或非热点突变，使用不
高于试剂盒标注的最低检测限的检测限参考品检测，试剂盒检测范围内标注的相应基因
突变均应检出。
b） CNAs：使用不高于拷贝数变异为4 的检测限参考品检测，试剂盒检测范围内标注的基因扩增
均应检出。
c） RNA 水平的Fusions：使用不高于100 拷贝/30 ng 的检测限参考品检测，试剂盒检测范围内
标注的融合基因均应检出。
注1： a）和b）适用于试剂盒检测对象为DNA 的情况，c）适用于试剂盒检测对象为RNA 的情况。
注2： a)1）中的热点突变的基因包括：EGFR/ALK/MET/ERBB2/ROS1/RETKRAS/NRAS/BRAF/PI3KCA/
KIT。
注3： 对于RNA 水平Fusions 检测，需在每 ng RNA 背景下考察其拷贝数的检测水平。
注4： 检测限与肿瘤核酸输入量、测序深度息息相关，对于声称更低检测限的试剂盒，需注意各要素的合理性。
若产品的预期用途中包括对拷贝数缺失的检测，企业应建立拷贝数缺失的检测限。
5.4.1.2　TMB
TMB 的检测限用肿瘤纯度来衡量，在检测限的建立过程中，宜使用生信肿瘤纯度进行评估。
TMB 检测限的建立和验证宜采用TMB‑H 的临床样本或参考品，按照不同的生信肿瘤纯度进行
稀释。
使用企业参考品中的TMB‑H 的检测限参考品或临床样本在试剂盒最低样本输入量条件下进行
检测，不高于20% 肿瘤纯度的检测限参考品结果应为TMB‑H。
注： 生信肿瘤纯度是通过将观察到的log‑ratio 和等位基因频率数据与统计模型进行拟合来计算的。该统计模型能
预测全基因组拷贝数、肿瘤倍性和肿瘤纯度（即生信肿瘤纯度）。log‑ratio 文件是通过将肿瘤测序reads 除以与
之匹配的正常对照样本的测序深度进行归一，然后使用Loess 回归进行GC 含量偏差校正得到的。等位基因频
率文件是从杂合的全基因组范围的SNP 中获得的。
5.4.1.3　MSI
MSI 的检测限用肿瘤纯度来衡量，在检测限的建立过程中，宜使用生信肿瘤纯度进行评估。
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MSI 检测限的建立和验证宜采用MSI‑H 的临床样本或参考品，按照不同的生信肿瘤纯度进行
稀释。
使用国家参考品或企业参考品中的检测限参考品在试剂盒最低样本输入量条件下进行检测，不高
于10% 肿瘤纯度的检测限参考品的检测结果应符合相应的微卫星不稳定性状态。
注： 基于高通量测序法的MSI 检测通常针对数十至数千个MSI 位点不等，不同于PCR 方法，在检测结果上通常没
有MSI‑L（微卫星低度不稳定）。
5.4.2　试验方法
按照试剂盒说明书操作，对国家参考品或企业参考品中的检测限参考品进行检测。
5.5　准确度
5.5.1　要求
5.5.1.1　SNVs/Indels/CNAs/Fusions
阳性符合率：使用试剂盒检测范围内的国家参考品或企业参考品的阳性参考品进行检测，检测结
果应为阳性，标注的基因突变位点均应被检出。
阴性符合率：使用国家参考品或企业参考品中的阴性参考品或试剂盒检测范围外阳性参考品进行
检测，检测结果应为阴性，试剂盒检测范围内的基因突变位点均不应检出。
阳性参考品的设置需遵循以下原则：
a） 针对试剂盒检测范围内的每一种基因突变类型设计具有代表性的阳性参考品；
b） 对于伴随诊断相关的基因突变，宜考虑该类参考品设置的合理性和完整性；需包含伴随诊断
相关的全部基因突变；但是当基因突变下涵盖不同的亚型时，如EGFR 基因的19 号外显子
缺失、MET 基因的14 号外显子跳跃、ALK 融合等，则需包括具有代表性的常见类型。
阴性参考品的设置需遵循以下原则：
a） 充分考虑可能存在的干扰、交叉、非特异等因素；
b） 包含一定数量的检测范围内基因型为野生型的样本；
c） 包含一定数量不在试剂（盒）宣称检测范围内，但易引起交叉反应的基因型别（如有）。
5.5.1.2　TMB
5.5.1.2.1　纳入TMB 计算的基因突变的准确度
应评估纳入TMB 计算的基因突变（包括SNVs 和Indels）的准确度。
使用肿瘤突变负荷国家参考品中差异性SNP/Indel 位点参考品进行检测，TMB‑10% 参考品的突
变检测准确度应分别不低于90.0%。
注： TMB 计算方法多样，不同方法对同义突变、驱动基因突变等是否纳入有不同选择。选择与试剂盒配套分析软
件中相同的方法进行评估。
5.5.1.2.2　TMB 检测的准确度
使用肿瘤突变负荷国家参考品中用于TMB 检测的参考品进行检测，TMB‑5% 和TMB‑10% 参
考品的标准TMB 值落在试剂盒检测计算的WES‑TMB 理论值90% 预测区间的比例应不少于90%；
或对TMB 企业参考品中的阳性参考品和阴性参考品进行检测，结果应均为相应的TMB 状态。
使用临床样本进行检测，WES‑TMB 落在试剂盒检测计算的WES‑TMB 理论值90% 预测区间的
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比例应不少于90%。
注1： TMB‑5%、TMB‑10% 指的是肿瘤纯度为5% 和肿瘤纯度为10% 的相应TMB 标准品。
注2： WES‑TMB 为全外显子组检测的TMB。
注3： 计算方法见肿瘤突变负荷检测国家参考品使用说明书。
注4： 临床样本的设置建议企业根据产品的阳性判断值，同时包含TMB‑H（阳性）和TMB‑L（阴性）样本。
TMB 准确度参考品的设置需遵循以下原则：
a） 根据检测限表现，考虑不同的肿瘤纯度；
b） 综合考虑试剂盒适用的肿瘤类型的实际TMB 值分布，包括不同的TMB 数值，建议
0 Muts/Mb ~40 Muts/Mb；
c） 包括评估纳入TMB 计算的基因突变检测准确度的样本，需考虑评估不同突变类型（包括
SNVs 和Indels）和纳入TMB 计算的不同突变频率。
5.5.1.3　MSI
阳性符合率：使用MSI 国家参考品或企业参考品中的阳性参考品进行检测，结果应为微卫星高度
不稳定性（MSI‑H）。
阴性符合率：使用MSI 国家参考品或企业参考品中的阴性参考品进行检测， 结果应为微卫星稳定
（MSS）。
MSI 准确度参考品设置需遵循以下原则：
a） 根据检测限表现，合理设置不同肿瘤纯度；
b） 根据阳性判断值，包含不同的微卫星不稳定位点比例的MSI 状态参考品。
5.5.2　试验方法
5.5.2.1　SNVs/Indels/CNAs/Fusions 以及MSI
阳性符合率：按照试剂盒说明书操作，对相应国家参考品或企业参考品中的阳性参考品进行检测。
阴性符合率：按照试剂盒说明书操作，对相应国家参考品或企业参考品中的阴性参考品进行检测。
5.5.2.2　TMB
纳入TMB 计算的基因突变的准确度：使用肿瘤突变负荷国家参考品中的14 号样本（TMB‑14）进
行检测。
TMB 的准确度：按照试剂盒说明书操作，对国家参考品中的14 号样本（TMB‑14）以外的其他参
考品进行检测；或对企业参考品中的阳性参考品或阴性参考品进行检测。
5.6　重复性
5.6.1　要求
5.6.1.1　SNVs/Indels/CNAs/Fusions
使用国家参考品或企业参考品中的重复性参考品，采用同一批次试剂盒重复检测10 次，检测结果
应与标注的已知的基因突变一致。
5.6.1.2　TMB
使用企业参考品中的重复性参考品，采用同一批次试剂盒重复检测10 次，检测结果应与标注的
TMB 状态一致。
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5.6.1.3　MSI
使用国家参考品或企业参考品中的重复性参考品，采用同一批次试剂盒重复检测10 次，检测结果
应与标注的MSI 状态一致。
重复性参考品设置需遵循以下原则：
a） SNVs、Indels、CNAs、Fusions：包含试剂盒检测范围中SNVs、Indels、CNAs、Fusions 的代表性
变异；
b） SNVs、Indels、CNAs、Fusions、TMB 和MSI：每一种类型，均至少包括弱阳性、中或强阳性水
平的重复性参考品。
5.6.2　试验方法
按照试剂盒说明书操作，对国家参考品或企业参考品中的重复性参考品进行10 次重复检测。
6　标签和使用说明书
应符合GB/T 29791.2 的规定，并符合以下要求：
a） 应说明注意事项，给出使用者能够降低风险的信息；
b） 应描述清楚每种突变类型的阳性判断值；
c） 应描述清楚性能特征；
d） 应描述清楚检测系统所需要但制造商不提供的特定设备、试剂盒、软件等。
注1： 关键注意事项见附录E。
注2： 阳性判断值和分析性能特征的研究见附录F。
7　包装、运输和贮存
7.1　包装
包装储运图示标志应符合GB/T 191 的规定。包装容器应保证密封性良好，完整，无泄漏，无
破损。
7.2　运输
试剂盒应按制造商的要求运输。在运输过程中，应防潮，防止重物堆压，避免阳光直射和雨雪浸
淋，防止与酸碱物质接触，防止内外包装破损。
7.3　贮存
试剂盒应在制造商规定条件下保存。
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附 录 A
（资料性）
第二代EGFR/ALK/MET 基因突变检测国家参考品
A.1　性状
提取自福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）肿瘤组织的DNA 样本和RNA 样本，无色液体。
A.2　用途
参考品原料系提取自福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）肿瘤组织的 DNA 样本和 RNA 样本，用于以
福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）或新鲜冷冻的肿瘤组织为待测样本的 EGFR/ALK/MET/ERBB2/
ROS1/RET 基因突变检测试剂盒的性能评价：准确度、特异性及检测限，适用于高通量测序（即第二代
测序技术，NGS）、数字 PCR 法、实时荧光 PCR 法。
注： 其他方法学产品用户需自行证明其适用性。
A.3　组成及突变位点
103 支/套，组成和突变位点等信息见表A.1。
表A.1　参考品信息
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
1‑EGFR‑G719S‑12%
2‑EGFR‑G719S‑5%
3‑EGFR‑G719S‑2.5%
4‑EGFR‑G719A‑16%
5‑EGFR‑G719A‑5%
6‑EGFR‑G719A‑2.5%
7‑EGFR‑G719C‑5%
8‑EGFR‑G719C‑2.5%
9‑EGFR‑L858R‑23%
10‑EGFR‑L858R‑5%
11‑EGFR‑L858R‑2.5%
12‑EGFR‑L861Q‑12%
13‑EGFR‑L861Q‑5%
14‑EGFR‑L861Q‑2.5%
15‑EGFR‑T790M‑10%
16‑EGFR‑T790M‑5%
17‑EGFR‑T790M‑2.5%
18‑EGFR‑S768I‑21%
19‑EGFR‑S768I‑5%
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
阳性参考品
检测限参考品
检测限参考品
阳性参考品
检测限参考品
检测限参考品
阳性参考品/检测限参考品
检测限参考品
阳性参考品
检测限参考品
检测限参考品
阳性参考品
检测限参考品
检测限参考品
阳性参考品
检测限参考品
检测限参考品
阳性参考品
检测限参考品
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
编号样本标示样本类型参考品性质浓度体积
8
YY/T 1946—2024
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
20‑EGFR‑S768I‑2.5%
21‑EGFR‑E709A‑9%
22‑EGFR‑E709A‑5%
23‑EGFR‑E709A‑2.5%
24‑EGFR‑E746_A750del‑11%
（COSM6225）
25‑EGFR‑E746_A750del‑5%
（COSM6225）
26‑EGFR‑E746_A750del‑2.5%
（COSM6225）
27‑EGFR‑E746_A750del‑9%
（COSM6223）
28‑EGFR‑E746_A750del‑5%
（COSM6223）
29‑EGFR‑E746_A750del‑2.5%
（COSM6223）
30‑EGFR‑L747_T751del‑22%
31‑EGFR‑L747_T751del‑5%
32‑EGFR‑L747_T751del‑2.5%
33‑EGFR‑E746_T751delinsA‑
5%
34‑EGFR‑E746_T751delinsA‑
2.5%
35‑EGFR‑L747_P753delinsS‑
13%
36‑EGFR‑L747_P753delinsS‑
5%
37‑EGFR‑L747_P753delinsS‑
2.5%
38‑EGFR‑L747_A750delinsP‑
15%
39‑EGFR‑L747_A750delinsP‑
5%
40‑EGFR‑L747_A750delinsP‑
2.5%
41‑EGFR‑E746_S752delinsV‑
14%
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
检测限参考品
阳性参考品
检测限参考品
检测限参考品
阳性参考品
检测限参考品
检测限参考品
阳性参考品
检测限参考品
检测限参考品
阳性参考品
检测限参考品
检测限参考品
阳性参考品
检测限参考品
阳性参考品
检测限参考品
检测限参考品
阳性参考品
检测限参考品
检测限参考品
阳性参考品
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
15　μL/支
12　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
表A.1　参考品信息 (续)
编号样本标示样本类型参考品性质浓度体积
9
YY/T 1946—2024
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
42‑EGFR‑E746_S752delinsV‑
5%
43‑EGFR‑E746_S752delinsV‑
2.5%
44‑EGFR‑A763_Y764insFQEA‑
24%
45‑EGFR‑A763_Y764insFQEA‑
5%
46‑EGFR‑A763_Y764insFQEA‑
2.5%
47‑EGFR‑S768_D770dup‑10%
48‑EGFR‑S768_D770dup‑5%
49‑EGFR‑S768_D770dup‑2.5%
50‑EGFR‑A767_V769dup‑20%
51‑EGFR‑A767_V769dup‑5%
52‑EGFR‑A767_V769dup‑2.5%
53‑ERBB2‑S310F‑16%
54‑ERBB2‑S310F‑5%
55‑ERBB2‑S310F‑2.5%
56‑ERBB2‑A775_G776insYVMA‑15%
57‑ERBB2‑A775_G776insYVMA‑5%
58‑ERBB2‑A775_G776insYVMA‑2.5%
59‑ERBB2‑G776delinsVC‑5%
60‑ERBB2‑G776delinsVC‑2.5%
61‑ALK‑L1196M‑9%
62‑ALK‑L1196M‑5%
63‑ALK‑L1196M‑2.5%
64‑ALK（E6‑A20）‑5%
65‑ALK（E6‑A20）‑2.5%
66‑ALK（E20‑A20）‑5%
67‑ALK（E20‑A20）‑2.5%
68‑ALK（E13‑A20）‑5%
69‑ALK（E13‑A20）‑2.5%
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
检测限参考品
检测限参考品
阳性参考品
检测限参考品
检测限参考品
阳性参考品
检测限参考品
检测限参考品
阳性参考品
检测限参考品
检测限参考品
阳性参考品
检测限参考品
检测限参考品
阳性参考品
检测限参考品
检测限参考品
阳性参考品/检测限参考品
检测限参考品
阳性参考品
检测限参考品
检测限参考品
阳性参考品/检测限参考品
检测限参考品
阳性参考品/检测限参考品
检测限参考品
阳性参考品/检测限参考品
检测限参考品
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
12　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
12　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
表A.1　参考品信息 (续)
编号样本标示样本类型参考品性质浓度体积
10
YY/T 1946—2024
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
81
82
83
84
85
86
87
88
89
90
91
92
93
94
95
96
70‑ROS1（C6：R33）‑5%
71‑ROS1（C6：R33）‑2.5%
72‑ROS1（C6：R34）‑5%
73‑ROS1（C6：R34）‑2.5%
74‑RET（K15：R12）‑9%
75‑RET（K15‑R12）‑5%
76‑RET（K15‑R12）‑2.5%
77‑MET‑Exon14　Splicing　Variant1‑15%（
c.3028+1G>A）
78‑MET‑Exon14　 Splicing　 Variant1‑5%（
c.3028+1G>A）
79‑MET‑Exon14　Splicing　Variant1‑2.5%（
c.3028+1G>A）
80‑MET‑Exon14 SplicingVariant2‑5%（
c.2888‑29_2888‑6del）
82‑MET 扩增‑10 拷贝
83‑MET 扩增‑4 拷贝
84‑ERBB2 扩增‑10 拷贝
85‑ ERBB2 扩增‑4 拷贝
86‑EGFR 扩增‑10 拷贝
87‑ EGFR 扩增‑4 拷贝
88‑阴性‑1
89‑阴性‑2
90‑阴性‑3
91‑阴性‑4
92‑阴性‑5
93‑ALK（E6‑A20）‑400 拷贝/
30 ng
94‑ALK（E6‑A20）‑100 拷贝/
30 ng
95‑ALK（E13‑A20）‑400 拷贝/
30 ng
96‑ALK（E13‑A20）‑100 拷贝/
30 ng
97‑ALK（E20‑A20）‑400 拷贝/
30 ng
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
RNA
RNA
RNA
RNA
RNA
阳性参考品/检测限参考品
检测限参考品
阳性参考品/检测限参考品
检测限参考品
阳性参考品
检测限参考品
检测限参考品
阳性参考品
检测限参考品
检测限参考品
阳性参考品/检测限参考品
阳性参考品
检测限参考品
阳性参考品
检测限参考品
阳性参考品
检测限参考品
阴性参考品
阴性参考品
阴性参考品
阴性参考品
阴性参考品
阳性参考品
检测限参考品
阳性参考品
检测限参考品
阳性参考品
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
12　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
表A.1　参考品信息 (续)
编号样本标示样本类型参考品性质浓度体积
11
YY/T 1946—2024
97
98
99
100
101
102
注： 参考品说明书会根据参考品的批次进行变更。
98‑ALK（E20‑A20）‑100 拷贝/
30 ng
99‑ROS1（C6‑R34）‑400 拷贝/
30 ng
100‑ROS1（C6‑R34）‑100 拷贝/
30 ng
101‑RET（K15‑R12）‑400 拷贝/
30 ng
102‑RET（K15‑R12）‑100 拷贝/
30 ng
103‑阴性‑1
RNA
RNA
RNA
RNA
RNA
RNA
检测限参考品
阳性参考品
检测限参考品
阳性参考品
检测限参考品
阴性参考品
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
表A.1　参考品信息 (续)
编号样本标示样本类型参考品性质浓度体积
12
YY/T 1946—2024
附 录 B
（资料性）
第二代KRAS/NRAS/BRAF/PIK3CA 基因突变检测国家参考品
B.1　性状
提取自福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）肿瘤组织的DNA 样本和RNA 样本，无色液体。
B.2　用途
参考品原料系提取自福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）肿瘤组织的 DNA 样本，用于以福尔马林固
定石蜡包埋（FFPE）或新鲜冷冻的肿瘤组织为待测样本的 KRAS/NRAS/BRAF/PI3KCA/KIT 基因
突变检测试剂盒的性能评价：准确度、特异性及检测限，适用于高通量测序（即第二代测序技术，NGS）、
数字PCR 法、实时荧光PCR 法。
注： 其他方法学产品用户需自行证明其适用性。
B.3　组成及突变位点
66 支/套，组成和突变位点等信息见表B.1。
表B.1　参考品信息
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
1‑KRAS‑G12D‑10%
2‑KRAS‑G12D‑5%
3‑KRAS‑G12D‑2.5%
4‑KRAS‑G12V‑10%
5‑KRAS‑G12V‑5%
6‑KRAS‑G12V‑2.5%
7‑KRAS‑G12C‑9%
8‑KRAS‑G12C‑5%
9‑KRAS‑G12C‑2.5%
10‑KRAS‑G12A‑9%
11‑KRAS‑G12A‑5%
12‑KRAS‑G12A‑2.5%
14‑KRAS‑G12S‑5%
15‑KRAS‑G12S‑2.5%
16‑KRAS‑G12R‑23%
17‑KRAS‑G12R‑5%
18‑KRAS‑G12R‑2.5%
19‑KRAS‑G13D‑13%
20‑KRAS‑G13D‑5%
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
阳性参考品
检测限参考品
检测限参考品
阳性参考品
检测限参考品
检测限参考品
阳性参考品
检测限参考品
检测限参考品
阳性参考品
检测限参考品
检测限参考品
阳性参考品/检测限参考品
检测限参考品
阳性参考品
检测限参考品
检测限参考品
阳性参考品
检测限参考品
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
编号样本标示样本类型参考品性质浓度体积
13
YY/T 1946—2024
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
21‑KRAS‑G13D‑2.5%
22‑KRAS‑G13C‑10%
23‑KRAS‑G13C‑5%
24‑KRAS‑G13C‑2.5%
25‑KRAS‑Q61H‑9%
（c.183A>C）
26‑KRAS‑Q61H‑5%
（c.183A>C）
27‑KRAS‑Q61H‑2.5%
（c.183A>C）
28‑KRAS‑Q61H‑10%
（c.183A>T）
29‑KRAS‑Q61H‑5%
（c.183A>T）
30‑KRAS‑Q61H‑2.5%
（c.183A>T）
31‑KRAS‑Q61L‑12%
32‑KRAS‑Q61L‑5%
33‑KRAS‑Q61L‑2.5%
34‑NRAS‑Q61L‑16%
35‑NRAS‑Q61L‑5%
36‑NRAS‑Q61L‑2.5%
37‑NRAS‑Q61K‑14%
38‑NRAS‑Q61K‑5%
39‑NRAS‑Q61K‑2.5%
40‑NRAS‑Q61H‑35%
（c.183A>C）
41‑NRAS‑Q61H‑5%
（c.183A>C）
42‑NRAS‑Q61H‑2.5%
（c.183A>C）
43‑NRAS‑Q61H‑10%
（c.183A>T）
44‑NRAS‑Q61H‑5%
（c.183A>T）
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
检测限参考品
阳性参考品
检测限参考品
检测限参考品
阳性参考品
检测限参考品
检测限参考品
阳性参考品
检测限参考品
检测限参考品
阳性参考品
检测限参考品
检测限参考品
阳性参考品
检测限参考品
检测限参考品
阳性参考品
检测限参考品
检测限参考品
阳性参考品
检测限参考品
检测限参考品
阳性参考品
检测限参考品
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
表B.1　参考品信息 （续）
编号样本标示样本类型参考品性质浓度体积
14
YY/T 1946—2024
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
注： 参考品说明书会根据参考品的批次进行变更。
45‑NRAS‑Q61H‑2.5%
（c.183A>T）
46‑BRAF‑V600E‑14%
47‑BRAF‑V600E‑5%
48‑BRAF‑V600E‑2.5%
49‑PIK3CA‑E542K‑35%
50‑ PIK3CA ‑E542K‑5%
51‑ PIK3CA ‑E542K‑2.5%
52‑ PIK3CA ‑E545K‑10%
53‑ PIK3CA ‑E545K‑5%
54‑ PIK3CA ‑E545K‑2.5%
55‑ PIK3CA ‑H1047R‑13%
56‑ PIK3CA ‑H1047R‑5%
57‑ PIK3CA ‑H1047R‑2.5%
59‑ PIK3CA ‑H1047L‑5%
60‑ PIK3CA ‑H1047L‑2.5%
61‑KIT‑D816V ‑26%
62‑KIT‑D816V ‑5%
63‑KIT‑D816V ‑2.5%
64‑阴性‑1
65‑阴性‑2
66‑阴性‑3
67‑阴性‑4
68‑阴性‑5
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
检测限参考品
阳性参考品
检测限参考品
检测限参考品
阳性参考品
检测限参考品
检测限参考品
阳性参考品
检测限参考品
检测限参考品
阳性参考品
检测限参考品
检测限参考品
阳性参考品/检测限参考品
检测限参考品
阳性参考品
检测限参考品
检测限参考品
阴性参考品
阴性参考品
阴性参考品
阴性参考品
阴性参考品
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
表B.1　参考品信息 （续）
编号样本标示样本类型参考品性质浓度体积
15
YY/T 1946—2024
附 录 C
（资料性）
肿瘤突变负荷国家参考品
C.1　性状
DNA 样本，无色液体。
C.2　用途
参考品原料系以11 对配对细胞系和1 对非配对细胞系提取的DNA，用于肿瘤突变负荷检测产品
的性能评价。适用于高通量测序法。
注： 其他方法学产品用户需自行证明其适用性。
C.3　组成和规格
60 支/套，25 ng/μL，15 μL/支，具体组成见表C.1。
表C.1　参考品组成
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
TMB‑1‑0%
TMB‑1‑1%
TMB‑1‑2%
TMB‑1‑5%
TMB‑1‑10%
TMB‑2‑0%
TMB‑2‑1%
TMB‑2‑2%
TMB‑2‑5%
TMB‑2‑10%
TMB‑4‑0%
TMB‑4‑1%
TMB‑4‑2%
TMB‑4‑5%
TMB‑4‑10%
TMB‑5‑0%
TMB‑5‑1%
TMB‑5‑2%
TMB‑5‑5%
TMB‑5‑10%
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
配对样本的control 样本
配对样本的control 样本
配对样本的control 样本
配对样本的control 样本
序号样本名称检测项目备注
16
YY/T 1946—2024
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
TMB‑6‑0%
TMB‑6‑1%
TMB‑6‑2%
TMB‑6‑5%
TMB‑6‑10%
TMB‑7‑0%
TMB‑7‑1%
TMB‑7‑2%
TMB‑7‑5%
TMB‑7‑10%
TMB‑8‑0%
TMB‑8‑1%
TMB‑8‑2%
TMB‑8‑5%
TMB‑8‑10%
TMB‑9‑0%
TMB‑9‑1%
TMB‑9‑2%
TMB‑9‑5%
TMB‑9‑10%
TMB‑11‑0%
TMB‑11‑1%
TMB‑11‑2%
TMB‑11‑5%
TMB‑11‑10%
TMB‑12‑0%
TMB‑12‑1%
TMB‑12‑2%
TMB‑12‑5%
TMB‑12‑10%
TMB‑13‑0%
TMB‑13‑1%
TMB‑13‑2%
TMB‑13‑5%
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
肿瘤基因突变负荷（TMB）
配对样本的control 样本
配对样本的control 样本
配对样本的control 样本
配对样本的control 样本
配对样本的control 样本
配对样本的control 样本
配对样本的control 样本
表C.1　参考品组成 （续）
序号样本名称检测项目备注
17
YY/T 1946—2024
55
56
57
58
59
60
TMB‑13‑10%
TMB‑14‑0%
TMB‑14‑1%
TMB‑14‑2%
TMB‑14‑5%
TMB‑14‑10%
肿瘤基因突变负荷（TMB）
差异性　SNP/Indel 位点
差异性　SNP/Indel 位点
差异性　SNP/Indel 位点
差异性　SNP/Indel 位点
差异性　SNP/Indel 位点
配对样本的control 样本
表C.1　参考品组成 （续）
序号样本名称检测项目备注
18
YY/T 1946—2024
附 录 D
（资料性）
微卫星不稳定性（MSI）检测国家参考品
D.1　性状
提取自福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织样本的 DNA 和提取自细胞系样本的 DNA，无色
液体。
D.2　用途
参考品原料系提取自福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织样本的 DNA 和提取自细胞系样本的
DNA，用于以福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）或新鲜冷冻的组织为待测样本的微卫星不稳定性（MSI）
检测试剂盒的性能评价：阳性参考品符合率、阴性参考品符合率及检测限，适用于高通量测序（即第二
代测序技术，NGS）、荧光 PCR‑毛细管电泳法。
注： 其他方法学产品用户需自行证明其适用性。
D.3　组成和规格
62 支/套，10 ng/μL，具体组成见表D.1。
表D.1　参考品信息
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
1‑1
1‑2
2‑1
2‑2
3‑1
3‑2
4‑1
4‑2
5‑1
5‑2
6‑1
6‑2
7‑1
7‑2
8‑1
8‑2
MSI‑1
MSI‑1 对照
MSI‑2
MSI‑2 对照
MSI‑3
MSI‑3 对照
MSI‑4
MSI‑4 对照
MSI‑5
MSI‑5 对照
MSI‑6
MSI‑6 对照
MSI‑7
MSI‑7 对照
MSI‑8
MSI‑8 对照
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
阳性参考品/
阳性参考品‑对照
阳性参考品/
阳性参考品‑对照
阳性参考品/
阳性参考品‑对照
阳性参考品/
阳性参考品‑对照
阳性参考品/
阳性参考品‑对照
阳性参考品/
阳性参考品‑对照
阳性参考品/
阳性参考品‑对照
阳性参考品/
阳性参考品‑对照
MSI‑H
/
MSI‑H
/
MSI‑H
/
MSI‑H
/
MSI‑H
/
MSI‑H
/
MSI‑H
/
MSI‑H
/
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
序号
样本编
号
样本名称
样本类
型
参考品性质
微卫星不稳
定性状态
浓度体积
19
YY/T 1946—2024
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
9‑1
9‑2
10‑1
10‑2
11‑1
11‑2
12‑1
12‑2
13‑1
13‑2
16‑1
16‑2
17‑1
17‑2
19‑1
19‑2
21‑1
21‑2
23‑1
23‑2
24‑1
24‑2
LOD1‑1
LOD1‑2
LOD1‑3
LOD1‑4
LOD3‑1
LOD3‑2
LOD3‑3
LOD3‑4
LOD4‑1
LOD4‑2
LOD4‑3
LOD4‑4
MSI‑9
MSI‑9 对照
MSI‑10
MSI‑10 对照
MSI‑11
MSI‑11 对照
MSI‑12
MSI‑12 对照
MSI‑13
MSI‑13 对照
MSI‑16
MSI‑16 对照
MSI‑17
MSI‑17 对照
MSI‑19
MSI‑19 对照
MSI‑21
MSI‑21 对照
MSI‑23
MSI‑23 对照
MSI‑24
MSI‑24 对照
MSI‑LOD1‑20%
MSI‑LOD1‑10%
MSI‑LOD1‑5%
MSI‑LOD1‑对照
MSI‑LOD3‑20%
MSI‑LOD3‑10%
MSI‑LOD3‑5%
MSI‑LOD3‑对照
MSI‑LOD4‑20%
MSI‑LOD4‑10%
MSI‑LOD4‑5%
MSI‑LOD4‑对照
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
阳性参考品/
阳性参考品‑对照
阳性参考品/
阳性参考品‑对照
阳性参考品/
阳性参考品‑对照
阳性参考品/
阳性参考品‑对照
阳性参考品/
阳性参考品‑对照
阳性参考品/
阳性参考品‑对照
阳性参考品/
阳性参考品‑对照
阳性参考品/
阳性参考品‑对照
阴性参考品/
阴性参考品‑对照
阴性参考品/
阴性参考品‑对照
阴性参考品/
阴性参考品‑对照
检测限参考品/
检测限参考品‑对照
检测限参考品/
检测限参考品‑对照
检测限参考品/
检测限参考品‑对照
MSI‑H
/
MSI‑H
/
MSI‑H
/
MSI‑H
/
MSI‑H
/
MSI‑H
/
MSI‑H
/
MSI‑H
/
MSS
/
MSS
/
MSS
/
MSI‑H
MSI‑H
MSI‑H
/
MSI‑H
MSI‑H
MSI‑H
/
MSS
MSS
MSS
/
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
15　μL/支
12　μL/支
12　μL/支
12　μL/支
12　μL/支
12　μL/支
12　μL/支
12　μL/支
12　μL/支
12　μL/支
12　μL/支
12　μL/支
12　μL/支
表D.1　参考品信息 （续）
序号
样本编
号
样本名称
样本类
型
参考品性质
微卫星不稳
定性状态
浓度体积
20
YY/T 1946—2024
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
LOD5‑1
LOD5‑2
LOD5‑3
LOD5‑4
LOD6‑1
LOD6‑2
LOD6‑3
LOD6‑4
LOD7‑1
LOD7‑2
LOD7‑3
LOD7‑4
MSI‑LOD5‑20%
MSI‑LOD5‑10%
MSI‑LOD5‑5%
MSI‑LOD5‑对照
MSI‑LOD6‑20%
MSI‑LOD6‑10%
MSI‑LOD6‑5%
MSI‑LOD6‑对照
MSI‑LOD7‑20%
MSI‑LOD7‑10%
MSI‑LOD7‑5%
MSI‑LOD7‑对照
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
DNA
检测限参考品/
检测限参考品‑对照
检测限参考品/
检测限参考品‑对照
检测限参考品/
检测限参考品‑对照
MSS
MSS
MSS
/
MSS
MSS
MSS
/
MSS
MSS
MSS
/
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
10　ng/μL
12　μL/支
12　μL/支
12　μL/支
12　μL/支
12　μL/支
12　μL/支
12　μL/支
12　μL/支
12　μL/支
12　μL/支
12　μL/支
12　μL/支
表D.1　参考品信息 （续）
序号
样本编
号
样本名称
样本类
型
参考品性质
微卫星不稳
定性状态
浓度体积
21
YY/T 1946—2024
附　录　E
（资料性）
试验过程中的关键注意事项
E.1　检测样本
试剂盒所处理的是从FFPE 样本中提取的核酸，需要明确FFPE 样本制备过程中的关键注意事
项。由于福尔马林固定处理会导致核酸与蛋白质的交联、片段化和化学修饰，因此建议在固定处理时
选择合适的固定试剂（如中性福尔马林缓冲液），并在低温条件下控制处理时间尽可能短。
需注意评估FFPE 样本中的肿瘤细胞含量，以确保检测结果的可靠性。当样本中肿瘤细胞不足
时，需进行细胞富集以满足检测要求。
E.2　核酸
无论是采用探针捕获法还是多重PCR 方法，它们都依赖于酶促扩增反应。然而，核酸中存在的抑
制剂可能会干扰靶标的检测，尤其是对于低水平的靶标。因此，为确保能够可靠地检测每个靶序列，需
要尽量减少抑制剂的存在。
对于肿瘤组织基因突变检测试剂盒所配套的提取试剂盒，也需要进行评估。评估指标通常包括核
酸量、核酸完整性和核酸纯度等。常用的评估方法包括荧光定量法、微量分光光度计法等，以确保提取
得到的核酸量能够满足实验室检测方法的最低核酸量要求。通过这样的评估，可确保从样本中提取到
高质量的核酸，为后续的检测和分析提供可靠的基础。
E.3　实验室
使用肿瘤组织基因突变检测试剂盒开展临床检测服务的实验室，实验室环境条件（如分区、通风、
温湿度、洁净度和防震要求等）、实验室人员的专业知识和能力、试剂耗材的质检、仪器设备配备与维护
校准等都需满足相关的规定。
开展临床检测前，需进行分析性能验证，按照试剂盒说明书内容与配套的核酸提取试剂盒、测序
仪、数据分析软件及其他必要的试剂和仪器设备等建立及完善整个检测系统，明确日常检测质量控制
标准及关键点，形成检测操作全过程说明书（SOPs），即分析前、分析中和分析后SOPs，并对检测全流
程进行记录，以保证检测结果具有可追溯性。所有SOPs 在日常检测中均需全员严格遵循，不能随意
改变。若试剂、软件及其版本参数和数据库等发生改变，实验室需要根据影响程度进行全流程或部分
检测环节的重新分析性能确认。实验室还需结合预期用途和患者临床资料（如病理检查、影像学检查
或临床发现）进行临床性能确认指标分析。单个实验室若无法通过本实验室的检测样本统计临床性能
指标，可通过检测无疾病人群获得临床特异性的指标。此外，还可根据相关文献，建立临床性能指标。
实验室还可阶段性统计核酸提取不合格率、文库构建不合格率、下机数据质控不合格率、测序深度
不合格率、覆盖均一性不合格率、污染率、各体细胞突变位点阳性率等，动态监测统计日常检测样本和
室内质控数据，观察变化以进行改善。核酸质量、文库质量或测序质量等不合格时，实验室需建立异常
情况处理程序（如让步检测、确认检测或不发出检测报告）。实验室还需要定期参加 EQA/PT 或进行
实验室间比对等，出现失控需要分析失控原因，并采取相应的纠正措施和预防措施。
22
YY/T 1946—2024
附　录　F
（资料性）
试剂盒设计开发中的阳性判断值研究和性能评价方法
F.1　阳性判断值
试剂盒在设计开发中，需建立和验证每一种突变类型的阳性判断值。
阳性判断值的建立方法包括： 1）通过检测一定数量的阴性和阳性样本，采用统计学方法如 ROC
曲线或PR（precision‑recall）曲线来确定合适的阳性判断值；2）通过检测一定数量的阴性临床样本，统计
分析各个基因位点的reads 数和标准差，并以reads 数加上3 倍的标准差作为阳性判断值；3）其他符合
统计学原理的方法。
TMB 的阳性判断值需根据预期用途，基于临床疗效数据来建立和验证。TMB 的阳性判断值用
Muts/Mb 表示，分为TMB‑H（阳性）和TMB‑L（阴性）。
MSI 的阳性判断值宜通过检测一定数量的阴性和阳性样本（根据参比方法，如PCR 法），采用统计
学方法如受试者特征曲线来确定。MSI 的阳性判断值以不稳定的MSI 位点的比例表示，分为MSI‑H
（微卫星高度不稳定，即阳性）和MSS（微卫星稳定，即阴性）。
F.2　分析性能评估
F.2.1　概述
体外诊断试剂的检测系统是可完成从样本处理到最终结果报告所有阶段的组合。肿瘤组织基因
突变检测试剂盒（高通量测序法）的检测系统除了该试剂盒以外，还包括核酸提取试剂盒、基因测序仪、
测序试剂、数据分析软件等。试剂盒设计开发时，需要采用完整、确定的检测系统进行分析性能评估，
至少包括适用的样本类型、检测限和空白限、准确度、精密度和分析特异性。
F.2.2　检测限和空白限
检测限（Limit of Detection，LoD），采用适当的模型（如Probit 分析）和分析方法，计算试剂盒在设
定概率下的检出限，一般在该检测浓度下该具有95% 的阳性检出率。
试剂盒需建立不同突变类型的LoD：
a） SNVs/Indels 通常评估变异等位基因频率（Variant Allel Frequency，VAF）；
b） Fusions（DNA 水平）通常评估变异等位基因频率（Variant Allel Frequency，VAF）或肿瘤
纯度；
c） Fusions（RNA 水平）通常评估特定RNA 水平下的拷贝数；
d） CNAs 通常评估拷贝数或肿瘤纯度；
e） TMB 和MSI 通常评估肿瘤纯度。
空白限（Limit of Blank，LoB）：在规定的条件下，不含被检测的分析物的空白样品被观察到的最大
检测结果。通常使用突变阴性的FFPE 样本或不包含肿瘤细胞的FFPE 样本。
F.2.3　准确度
准确度研究的方式包括方法学比对和参考品的检测，可通过阳性符合率（ nositive percent agreement，
PPA）和阴性符合率（negative percent agreement NPA）来评价定性测定的准确度 。
方法学比对可采用已上市产品，或者另一经过确认的方法。SNVs 和Indels 的比较方法可采用
23
YY/T 1946—2024
Sanger 测序、等位基因特异性PCR 等；CNAs 的比较方法，可采用实时荧光定量PCR、荧光原位杂交
（FISH）等；Fusions 的比较方法可采用 FISH、实时荧光 PCR、转录组测序等；TMB 的比较方法可采用
WES；MSI 的比较方法可采用PCR 或IHC。
F.2.4　分析特异性
分析特异性受干扰和交叉反应的影响。需分析待测样本中及试剂使用过程中潜在的干扰物质和
交叉反应，并对干扰和交叉的程度进行量化。
交叉反应（如同源区域、假基因和其他类型的交叉反应序列）可能导致错误检测，从而产生假阳性
结果。患者标本的交叉污染可能将其他不正常的序列引入检测中，从而导致假阳性或假阴性结果。因
此，需要选择产品预期用途所覆盖样本类型以及DNA 提取方法中相关的干扰物质开展研究。同时，
需要对已知交叉反应的等位基因和同源区域进行评估。
F.2.5　精密度
精密度包括重复性、中间精密度和再现性。
重复性指在重复性条件下的精密度，包括相同测量程序、相同操作者、相同测量系统、相同操作条
件和相同地点，并且在短时间段内对同一或相似被测对象重复测量。
再现性又称实验室间精密度，指在包括了不同地点、不同操作者、不同测量系统的测量条件下对同
一或相似被测对象重复测量的精密度，其中不同测量系统可使用不同测量程序。
重复性和再现性是精密度的两种极端情况，介于两种极端情况之间的精密度，称为中间精密度，指
在包括相同的测量程序、相同地点的测量条件下对相同或相似的被测对象在一长时间段内重复测量的
精密度，可包含其他相关条件的改变，例如不同操作者、试剂批号等。实验室内精密度考虑了体外诊断
试剂在医学实验室使用过程中的运行、时间等影响因素，归类为中间精密度的一种情况。
需要根据各测量条件对检测结果影响程度的分析，设计合理的精密度试验方案进行评价，包括重
复性、实验室内精密度、实验室间精密度和批间（lot‑to‑lot）精密度。
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YY/T 1946—2024
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