现代发酵工程丛书 现代发酵微生物实验技术 第2版 [诸葛斌，诸葛健 主编] 2011年版

现代发酵工程丛书 现代发酵微生物实验技术 第2版
作者：诸葛斌，诸葛健 主编
出版时间： 2011年版
丛编项： 现代发酵工程丛书
内容简介
　　本书作者所在的发酵工程学科是我国最早授予的国家重点学科之一，参与编写者在教学与科研上都有较为丰富的实践经验和研究成果。 本书延续了《现代发酵微生物实验技术》（第一版）编写中“图文并茂，有论述，有操作，有结果”的特色。 在内容上保留了显微技术、微生物细胞特殊结构的观察、噬菌体、标记菌种获得与应用、原生质体系列育种技术和固定化细胞生物转化等实用技术，并结合本研究室近几年的研究经？，对基因工程育种技术部分实验进行了修订，增加了基因敲除、定点突变、表达蛋白提纯等实验技术，使该章节体系更完善。 新增了第八章“菌种保藏与机构”和第二章中“酵母菌子囊孢子的形成及观察”等相关实验技术。 本书适合高等院校微生物学、发酵工程、生物工程、食品工程等专业的高年级本科生及研究生阅读使用，也可供相关科研人员参考。
目录
第一章显微技术
第一节显微观察
一、相差显微镜
实验11相差显微镜的使用
二、荧光显微镜
实验12荧光显微镜的使用
三、电子显微镜
实验13细菌、酵母菌超薄切片的透射电镜观察
实验14噬菌体的透射电镜观察
实验15质粒DNA的透射电镜观察
实验16酵母细胞的扫描电镜观察
第二节显微摄影
实验17显微摄影、菌落摄影和凝胶摄影
第三节放射自显影
实验18硝酸纤维素滤纸上标记DNA的放射自显影
第四节显微操作技术用于单细胞分离
实验19显微操纵器用于单细胞分离
实验110显微操纵器用于酵母子囊的解剖及子囊孢子单孢化
实验111玻璃微型工具的制作
第五节流式细胞仪测定细胞核内DNA的含量
实验112流式细胞仪计数法
第二章微生物细胞特殊结构的观察
第一节染色技术
一、染色的基本原理
二、染料
三、染色
实验21真菌的荧光染色与观察
第二节细胞主要结构成分的分离与观察
实验22革兰阳性细菌细胞壁的制备
实验23酵母细胞壁甘露聚糖的制备
实验24细胞壁的形态观察
实验25革兰阴性菌细胞外膜蛋白的分离
实验26细菌荚膜的观察
实验27细菌鞭毛的观察
实验28微生物细胞核的观察
实验29细菌染色体DNA的分离与观察
实验210异染颗粒的观察
实验211酵母细胞内脂肪颗粒和肝糖颗粒的观察
实验212酵母液泡及线粒体的提取
第三节芽孢、子囊孢子和假菌丝的观察
一、芽孢
实验213细菌芽孢形成及发芽的观察
实验214伴孢晶体的观察
二、酵母子囊孢子
实验215酵母子囊孢子的形成及观察
实验216酿酒酵母单倍体细胞的制备与鉴定
三、流式细胞术
实验217酿酒酵母染色体倍性鉴定
四、酵母假菌丝
实验218酵母假菌丝的观察
第三章噬菌体
实验31噬菌体的分离与纯化
实验32高效价噬菌体原液的制备
实验33溶源菌的鉴定
实验34抗噬菌体产α淀粉酶菌株的选育
第四章标记菌种的获得与应用
第一节富集培养技术在获得标记菌种中的应用
一、营养缺陷型富集法在原核细胞中的应用
实验41芽孢杆菌营养缺陷型的筛选
二、营养缺陷型富集法在真核细胞中的应用
实验42酵母营养缺陷型的筛选
实验43青霉菌营养缺陷型菌株的筛选
三、浓度梯度法富集抗性突变株
四、富集法在研究次级代谢的重组DNA技术中的应用
第二节营养缺陷型标记菌种的获得
一、诱变方法
二、淘汰野生型
三、检出缺陷型
四、营养缺陷型生长谱的确定
实验44芽孢杆菌营养缺陷型生长谱的确定
第三节呼吸缺陷型标记菌种的获得
实验45酵母呼吸缺陷型的筛选
第四节抗反馈调节抗性突变株的获得与应用
实验46氨基酸抗反馈调节突变株的选育
第五章原生质体系列育种技术
第一节工业菌种育种的策略
第二节原生质体融合育种
一、原生质体融合育种的特点
二、原生质体融合育种步骤与要点
三、原生质体再生率和融合率的计算
实验51芽孢杆菌的原生质体融合
实验52链霉菌原生质体融合
实验53小单胞菌的原生质体融合
实验54酿酒酵母的原生质体融合
实验55丝状真菌的原生质体融合
第三节原生质体转化育种
实验56芽孢杆菌原生质体转化
实验57质粒DNA转化链霉菌原生质体
实验58酿酒酵母的原生质体转化法
实验59真菌原生质体转化
第四节原生质体诱变育种
实验510芽孢杆菌种间融合子F262原生质体诱变育种
实验511紫外线诱变原生质体选育L谷氨酸高产菌
第五节原生质体技术中的一些特殊技术
一、紫外线照射原生质体增加融合率
二、供体原生质体的热灭活
三、原生质体电融合技术
实验512电诱导酵母原生质体融合
四、遗传转移
实验513原生质体融合法转移酵母线粒体及杀伤质粒
第六章基因工程育种技术
第一节基因工程的基本过程和原理
一、载体
二、DNA重组用酶
第二节大肠杆菌基因工程
一、大肠杆菌感受态细胞的制备和转化
实验61用氯化钙制备和转化感受态大肠杆菌
实验62用氯化钙制备感受态大肠杆菌
实验63用PEG制备和转化大肠杆菌感受态细胞
实验64大肠杆菌的电击转化
二、大肠杆菌中质粒的提取与纯化
实验65质粒的大量提取与纯化
实验66质粒的小量提取
实验67用硅胶膜分离法小量提取质粒
三、外源基因在大肠杆菌中的高表达
实验68载体和基因的酶切
实验69基因与载体的连接
第三节非大肠杆菌微生物基因工程
一、芽孢杆菌基因工程
实验610枯草杆菌感受态细胞的制备和转化
实验611枯草杆菌染色体DNA的提取
实验612枯草芽孢杆菌（Bacillus　subtilis）碱性果胶酶基因的PCR扩增
实验613从电泳凝胶中分离枯草芽孢杆菌（Bacillus　subtilis）碱性果胶酶基因
实验614枯草杆菌转化子质粒的提取和检测
实验615地衣芽孢杆菌感受态细胞的诱导形成及其高效电转化
二、酵母基因工程
实验616酵母染色体DNA的提取
实验617酿酒酵母的乙酸锂完整细胞转化法
实验618单链载体DNA的制备
实验619酵母菌质粒DNA的提取
实验620碱性果胶酶基因重组巴斯德毕赤酵母的构建
实验621羟酸还原异构酶基因多拷贝重组啤酒酵母的构建
第四节其他基因工程育种常用技术
实验622酿酒酵母W303甘油酯酶GPP2基因敲除技术
实验623粗糙脉孢菌漆酶基因的定点突变技术
第五节蛋白质纯化技术
实验624利用His标签进行Ni柱纯化甘油脱氢酶的分离技术
实验625离子交换色谱技术分离纯化蛋白质
第七章微生物细胞固定化方法
第一节载体结合法
一、表面吸附法
二、共价结合法
实验71Amycolatopsis　spST2710的载体固定化
第二节交联法
第三节包埋法
一、藻酸钙凝胶包埋法
实验72酿酒酵母的藻酸钙固定化
实验73固定化枯草杆菌连续生产耐热α淀粉酶
二、κ角叉胶包埋法
实验74κ角叉胶一步包埋法
实验75κ角叉胶二步包埋法
实验76固定化酵母连续生产酒精
实验77固定化细胞的回收与活细胞计数
三、聚丙烯酰胺凝胶包埋法
实验78大肠杆菌的聚丙烯酰胺凝胶固定化
四、光交联树脂前聚体包埋法
实验79光交联树脂固定化原生质体
第八章菌种保藏方法与机构
第一节菌种的退化与防治措施
一、菌种退化的现象及原因
二、防止退化措施
第二节常用菌种保藏
一、菌种保藏的原理
二、常用的菌种保藏方法
实验81斜面保藏法
实验82液体石蜡保藏法
实验83载体保藏法
实验84甘油管低温保藏法
实验85液氮冷冻保藏法
实验86真空冷冻干燥保藏法
第三节基因工程菌的保藏
第四节著名菌种保藏及专利菌种保藏机构
一、中国微生物菌种保藏管理委员会组织系统
二、国际著名菌种保藏机构
三、国际确认的专利菌种保藏机构（IDA）
参考文献